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- 病理学实验
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- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
DAPI染色实验
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固定细胞或组织样本
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对于细胞样本，通常可以使用 4% 的多ju甲醛在室温下固定 15 - 30 分钟。固定可以保存细胞的形态和结构，防止在后续操作中细胞解体或抗原丢失。
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对于组织样本，可能需要先进行切片处理，然后进行固定。常用固定方法包括石蜡包埋切片后的脱蜡处理再固定，或者冷冻切片后直接固定。
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通透处理（如果需要）
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有些情况下，细胞或组织样本的细胞膜会阻碍 DAPI 进入细胞内部。这时可以使用通透剂，如 0.1% - 0.5% 的 Triton X - 100，在室温下孵育 5 - 15 分钟，以增加细胞膜的通透性，使 DAPI 更容易与细胞内的 DNA 结合。
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不过，像一些已经固定好的组织切片，其组织结构较为疏松，可能不需要进行通透处理。这需要根据具体的样本类型和实验目的来决定。
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DAPI 染色
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配制 DAPI 染色液，一般浓度为 1 - 5μg/ml。可以按照试剂盒的说明或实验经验来配制。将固定和通透处理后的样本放入 DAPI 染色液中，在室温或 37℃下避光孵育 5 - 30 分钟。孵育时间不宜过长，以免产生过强的背景信号。
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例如，在细胞核形态观察实验中，对于已经用多ju甲醛固定并用 Triton X - 100 通透的培养细胞，将样本放入 5μg/ml 的 DAPI 染色液中，37℃避光孵育 15 分钟。
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洗涤
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染色完成后，用适当的缓冲液（如 PBS）洗涤样本 2 - 3 次，每次 5 - 10 分钟，以去除未结合的 DAPI 染料。这一步骤很重要，可以减少背景荧光，提高染色图像的清晰度。
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洗涤后尽量吸干样本上的液体，但要注意避免完全干燥，因为干燥可能会导致细胞或组织样本变形。
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封片（对于显微镜观察）
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对于需要在荧光显微镜下观察的样本，可以使用抗荧光淬灭剂封片。将样本放置在载玻片上，滴加适量的抗荧光淬灭剂，然后用盖玻片覆盖。抗荧光淬灭剂可以减缓 DAPI 荧光信号的衰减，使图像能够长时间保持清晰。
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不同的抗荧光淬灭剂有不同的使用方法，有些可能需要先将样本放入其中，而有些则可以与样本混合后封片。
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细胞核形态观察
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在细胞生物学研究中，DAPI 染色是观察细胞核形态的经典方法。通过荧光显微镜可以清楚地看到细胞核的大小、形状和染色质的分布情况。例如，在研究细胞凋亡过程中，细胞核会发生凝聚、碎片化等形态学变化，DAPI 染色可以帮助区分正常细胞和凋亡细胞。
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细胞周期分析
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结合其他方法（如流式细胞术），DAPI 染色可以通过测量细胞核内 DNA 含量来分析细胞周期。在细胞周期的不同阶段，DNA 含量是不同的，G1 期和 S 期、G2 期的 DNA 含量依次增加。通过对大量细胞进行 DAPI 染色后进行流式细胞术检测，可以统计各周期阶段的细胞比例。
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核仁研究
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核仁是细胞核内的重要结构，与核糖体 RNA 的合成和加工有关。DAPI 染色也可以用于核仁的研究，因为它能够显示核仁与周围染色质的关系。在一些研究核糖体生物发生或核仁相关疾病（如某些癌症）的实验中，DAPI 染色有助于观察核仁的形态变化。
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避光操作
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DAPI 是一种光敏感的染料，在整个实验过程中，包括染色液的配制、样本的孵育、洗涤和观察等环节，都要尽量避光操作。因为光照可能会导致 DAPI 荧光信号的淬灭或染色特性的改变。
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染色时间控制
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染色时间需要根据样本类型和实验要求进行优化。染色时间过短可能导致染色不够充分，细胞核显示不清晰；染色时间过长则可能会产生过强的背景信号，影响结果的准确性。
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DAPI 溶液的保存
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DAPI 染色液应储存在 - 20℃的环境中，并且避免反复冻融。反复冻融可能会导致染料的降解或聚集，从而影响染色效果。同时，要确保染色液的密封性，防止水分或其他杂质进入而改变染料的浓度和性质。
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文献和实验；(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；(3)PBS漂洗；(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；(5)荧光显微镜观察。结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
用DAPI进行细胞染色DAPI的配置Stock solution of 1mg/ml in ddH2O; working solution of 0.25mg/ml to 50mg/ml in ddH2O or PGM.1.Place sample on slide.2.Add a few drops working solution.3.Squash and view.Staining � DAPI Staining for Cells:Separately DAPI staining
前一段时间做干细胞的DAPI染色，把自己收集的一些相关资料和自己的经验写在这里，希望能够给做DAPI染色的战友一点帮助。 将培养中的细胞进行DAPI染色，标记细胞核。 DAPI保存：放在4℃保存。 DAPI配制：使用无菌三蒸水溶解，可以将10mgDAPI溶解在10ml水中，使用冻存管分装，每一管1ml，－20℃冻存。使用的时候，先取一管放在4℃。 染色：把培养皿中的培养基换一次液，每一个皿中放4－8ml培养基，使用微量加样器加DAPI到培养皿中。浓度 50ug/ml
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