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- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
肺组织HE染色实验
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取材和固定
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取合适的肺组织样本，一般选择具有代表性的区域，如病变明显的部位或正常组织对照区域。组织块大小通常为 0.3 - 0.5cm × 0.3 - 0.5cm × 0.3 - 0.5cm。将组织放入 10% 的中性缓冲甲醛固定液中，固定时间一般为 12 - 24 小时。固定液的量应为组织体积的 10 - 20 倍，固定可以保存组织的形态，防止自溶和腐败。
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脱水、透明和包埋
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脱水：将固定后的肺组织依次放入 70%、80%、90%、95%（两次）和 100%（两次）乙醇中脱水，每次 1 - 2 小时。乙醇能逐渐替代组织中的水分，使组织变得硬实，便于切片。
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透明：将脱水后的组织放入二甲苯中透明，一般先放入二甲苯 - 乙醇（1:1）混合液中 30 分钟左右，然后放入纯二甲苯中 1 - 2 小时。透明的目的是使组织变得透明，便于观察，同时为后续石蜡包埋做准备。
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包埋：将透明后的组织放入熔化的石蜡中，等待石蜡凝固，形成蜡块。石蜡包埋可以将组织固定成一定的形状，便于切片。
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切片
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使用轮转式切片机将石蜡包埋好的肺组织切成厚度为 4 - 6μm 的切片。切片时要保持刀锋锐利，切片动作轻柔、均匀，以获得完整、平整的切片。
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染色
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脱蜡和水化：将切片放入二甲苯中脱蜡，每次 10 - 15 分钟，共 2 - 3 次，然后依次放入 100%、95%、80%、70% 乙醇中水化，每次 2 - 5 分钟，最后用蒸馏水冲洗。
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苏木素染色：将切片放入苏木素染液中染色，一般染色 5 - 10 分钟。染色后用自来水冲洗片刻，再用盐酸酒精分化，分化至切片呈浅蓝色为止。分化后立即用自来水冲洗，终止分化反应，这一步是关键，分化过度会使细胞核颜色过浅，分化不足则会使切片整体呈蓝色。
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伊红染色：将切片放入伊红染液中染色 2 - 5 分钟，然后用 70% 乙醇快速冲洗，去除多余的伊红染料。
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脱水、透明和封片
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脱水：依次将切片放入 70%、80%、90%、95%、100% 乙醇中脱水，每次 2 - 5 分钟。
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透明：将切片放入二甲苯中透明，一般 2 - 3 次，每次 5 - 10 分钟，使切片变得透明。
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封片：在切片上滴加适量的中性树胶，盖上盖玻片，用镊子轻轻压平，赶走气泡，使树胶均匀地填充在切片和盖玻片之间，树胶可以防止切片氧化变色，同时起到保护切片和便于显微镜观察的作用。
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正常肺组织结构观察
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通过 HE 染色可以清晰地观察到肺组织的各级支气管、肺泡、血管等结构。例如，可以观察支气管的管壁结构，包括上皮细胞、杯状细胞、平滑肌等；肺泡的结构，如肺泡壁、肺泡隔中的毛细血管等，这有助于了解肺组织的正常生理结构，为后续的研究和诊断提供基础。
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肺部疾病诊断
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在肺部炎症的诊断中，HE 染色可以显示炎症细胞的浸润情况，如中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等在肺泡腔、肺间质中的分布。例如，在细菌性肺炎中，可以看到大量中性粒细胞浸润在肺泡腔内；在肺结核中，可以观察到典型的结核结节，其中包含上皮样细胞、朗罕巨细胞和淋巴细胞等。
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对于肺部肿瘤，HE 染色可以帮助区分肿瘤的类型。例如，肺腺癌细胞排列成腺管状结构，细胞质染成淡粉色，细胞核较大且深染；肺鳞癌细胞呈巢状排列，细胞质嗜酸性，角化珠的形成是其特征之一；小细胞肺癌细胞较小，核染色质细，核仁不明显，细胞质少，呈弥漫性分布。
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肺纤维化的研究
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HE 染色可以显示肺间质中胶原纤维的增生情况，观察肺泡壁的增厚、纤维组织的沉积等病变。在研究肺纤维化的病因、发病机制和治疗效果等方面发挥重要作用。
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切片质量控制
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切片时要注意切片的厚度均匀，避免出现折叠、破裂等情况。如果切片过厚，会影响观察效果，过薄则容易破碎。同时，切片要完整，能够完整地展示肺组织的结构，特别是对于病变组织，要保证包含完整的病变区域。
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染色时间优化
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苏木素和伊红的染色时间要根据实际情况进行调整。染色时间过长会导致过染，颜色过深，影响观察；染色时间过短则会使颜色过浅，无法清晰显示组织结构。例如，在苏木素染色过程中，对于细胞核密集的区域，可能需要适当延长染色时间；而对于细胞质丰富的区域，伊红染色时间可能需要适当增加。
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试剂质量保证
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所使用的试剂，如苏木素染液、伊红染液、固定液等，要保证其质量和纯度。试剂的质量会直接影响染色效果，过期或变质的试剂会导致染色不准确。同时，要注意试剂的保存条件，如苏木素染液应密封保存，防止氧化。
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