上海脾脏HE染色实验

实验步骤

1. 样本采集与固定
   • 动物选择与麻醉：选择合适的小鼠或大鼠等实验动物，使其麻醉。
   • 样本采集：迅速打开动物腹腔，取出脾脏，尽量避免挤压和过度触碰，用预冷的生理盐水冲洗脾脏，去除表面血污和杂质，用滤纸吸干水分。
   • 固定：将脾脏组织块置于 4% 中性缓冲甲quan溶液（又称 10% 中性缓冲甲quan溶液，由 40% 甲quan溶液稀释 10 倍制得）中固定 24-48 小时。Helly 固定液也是制作大鼠脾石蜡切片 HE 染色标本的理想固定液。
2. 脱水与透明
   • 脱水：将固定好的组织依次放入 70%、80%、90%、95% 和 100% 的乙醇中进行脱水，每个浓度的乙醇中停留 30 分钟左右。脱水过程中应注意避免组织干燥，防止组织收缩和变形。
   • 透明：将脱水后的组织放入二甲苯中透明 2 次，每次 15-30 分钟，使组织完全透明，便于后续石蜡包埋。
3. 石蜡包埋
   • 浸蜡：将透明后的组织放入 60℃左右的石蜡中进行浸蜡，使组织块表面充分浸润石蜡。
   • 包埋：将浸蜡后的组织块放入模具中，注入熔化的石蜡，确保组织块完全被石蜡包围，待石蜡凝固后形成蜡块。
4. 切片
   • 修蜡块：用刀片将蜡块修整成合适的形状和大小，使切片更加平整和规则。
   • 切片：将蜡块安装在切片机上，切成厚度为 3-5μm 的切片。切片过程中应保持切片机刀片锋利，避免切片出现褶皱和破裂。
   • 展片与烤片：将切片放入 40℃左右的水浴中展片，使切片完全展开，然后捞至载玻片上，置于烤箱中烤片 1-2 小时，使切片与载玻片粘附牢固。
5. 脱蜡与水化
   • 脱蜡：将切片放入二甲苯中脱蜡 2 次，每次 15 分钟，使切片中的石蜡完全溶解。
   • 水化：将脱蜡后的切片依次放入 100%、95%、80%、70% 的乙醇中进行水化，每个浓度的乙醇中停留 5 分钟左右，最后用蒸馏水冲洗切片，使切片充分水化。
6. 染色
   • 苏木素染色：将水化后的切片放入苏木素染液中染色 5-10 分钟，使细胞核染成蓝色。
   • 分化与冲洗：将切片放入 1% 盐酸酒精溶液中分化数秒，使过量的苏木素染料分化掉，然后用自来水冲洗数分钟，直到切片上的蓝色变为淡蓝色为止。
   • 伊红染色：将切片放入伊红染液中染色 2-3 分钟，使细胞质和细胞外基质染成红色。
7. 脱水与透明
   • 脱水：将染色后的切片依次放入 70%、80%、90%、95% 和 100% 的乙醇中进行脱水，每个浓度的乙醇中停留 3-5 分钟，使切片完全脱水。
   • 透明：将脱水后的切片放入二甲苯中透明 2 次，每次 10 分钟左右，使切片变得透明，便于后续观察。
8. 封片
   • 滴加封片剂：在切片上滴加适量的中性树胶等封片剂。
   • 盖上盖玻片：用镊子夹起盖玻片，轻轻覆盖在切片上，注意避免产生气泡，待封片剂凝固后即可。