EB病毒PCR试剂盒

产品简介：
EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV，EB 病毒）又叫人疱疹病毒 4 （Human Herpesvirus 4, HHV-4)，它是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成 员，基因组为 DNA。EB 病毒具有在体内外专一性地感染人类及某些灵长类 B 细胞的生物学特性。人是 EB 病毒感染的宿主，主要通过唾液传播。无症状感 染多发生在幼儿，3～5 岁幼儿 90%以上曾感染 EB 病毒，90%以上的成人都 有病毒抗体。EB 病毒是传染性单核细胞增多症的病原体，此外 EB 病毒与鼻咽 癌、儿童淋巴瘤的发生有密切相关性，被列为可能致癌的人类肿瘤病毒之一。 本公司开发了 EB 病毒的 PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增 EB 病毒，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
EB病毒PCR 引物混合液	13-60800yw	100 μL（白盖）
EB病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-60800pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-60800sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout，其使用手册可以从本公 司网站搜索产品名称或产品编号 70701-50 下载。 2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μLEB 病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而 得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上 待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
EB病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（EB病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	54℃	30sec
	72℃	35 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 518bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。