转基因元件tOCS PCR试剂盒

转基因元件tOCS PCR试剂盒实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
(S100A13)ELISA试剂盒
胰岛素样生长因子结合蛋白样1抗体    S100A12 ELISA Kit    S100钙结合蛋白A12(S100A12)ELISA试剂盒
免疫球蛋白D重链保守区抗体    S100A10 ELISA Kit    S100钙结合蛋白A10(S100A10)ELISA试剂盒
IV型己糖激酶抗体    S100 ELISA Kit    S100钙结合蛋白(S100)ELISA试剂盒
免疫球蛋白lambda样肽1抗体    RSPO4 ELISA Kit    R-脊椎蛋白4(RSPO4)ELISA试剂盒
NF-kappa-B抑制子beta抗体    RSPO3 ELISA Kit    R-脊椎蛋白3(RSPO3)ELISA试剂盒
NF-kappa-B抑制子epsilon抗体    RSPO2 ELISA Kit    R-脊椎蛋白2(RSPO2)ELISA试剂盒
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体    RSPO1 ELISA Kit    R-脊椎蛋白1(RSPO1)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白172抗体    RUNX2 ELISA Kit    Runt相关转录因子2(RUNX2)ELISA试剂盒
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体    RPESP ELISA Kit    RPE脊椎蛋白(RPESP)ELISA试剂盒
肽酰tRNA水解酶ICT1抗体    ROPN1 ELISA Kit    Ropporin1蛋白(ROPN1)ELISA试剂盒
alpha干扰素诱导蛋白27抗体    ROPN1B ELISA Kit    Ropporin1B蛋白(ROPN1B)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白81抗体    TTF1 ELISA Kit    RNA聚合酶转录终止因子Ⅰ(TTF1)ELISA试剂盒
Gamma干扰素诱导蛋白16抗体    RBM38 ELISA Kit    RNA结合基元蛋白38(RBM38)ELISA试剂盒
异柠檬酸脱氢酶3 beta亚基抗体    RBM24 ELISA Kit    RNA结合基元蛋白24(RBM24)ELISA试剂盒
干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白1抗体    RBM20 ELISA Kit    RNA结合基元蛋白20(RBM20)ELISA试剂盒
异柠檬酸脱氢酶gamma亚基抗体    RNMT ELISA Kit    RNA甲基转移酶(RNMT)ELISA试剂盒
Bipped B样蛋白抗体    RIOK3 ELISA Kit    RIO激酶3(RIOK3)ELISA试剂盒
艾杜糖-2-硫酸酯酶抗体    RIOK2 ELISA Kit    RIO激酶2(RIOK2)ELISA试剂盒
α-L-艾杜糖苷酶抗体    RIOK1 ELISA Kit    RIO激酶1(RIOK1)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白122抗体    RFFL ELISA Kit    Rififylin蛋白(RFFL)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白140抗体    ARHGDIα ELISA Kit    RhoGDP解离抑制因子α(ARHGDIα)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白20抗体    RHPN2 ELISA Kit    Rho蛋白2(RHPN2)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白43抗体    RHPN1 ELISA Kit    Rho蛋白1(RHPN1)ELISA试剂盒
细胞纤毛内转运同源蛋白80抗体    RTKN2 ELISA Kit    Rhotekin2蛋白(RTKN2)ELISA试剂盒
CD101抗体    RTKN ELISA Kit    Rhotekin蛋白(RTKN)ELISA试剂盒
免疫球蛋白超家族成员5抗体    RET ELISA Kit    RET原癌基因(RET)ELISA试剂盒
alpha干扰素诱导蛋白27样蛋白2抗体    RCOR3 ELISA Kit    REST辅抑制因子3(RCOR3)ELISA试剂盒
转基因元件tOCS PCR试剂盒胰岛素抗体    RCOR2 ELISA Kit    REST辅抑制因子2(RCOR2)ELISA试剂盒
    RCOR1 ELISA Kit    REST辅抑制因子1(RCOR1)ELISA试剂盒
中间丝家族孤啡肽2蛋白抗体    RPRM ELISA Kit    Reprimo蛋白(RPRM)ELISA试剂盒
基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。

PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。