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- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称:
动物造模实验
一、化学诱导法
-
DSS诱导法
- 步骤:给予大鼠自由饮用含2-5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液,持续5-7天可建立急性模型;通过周期性给药(如3天DSS+4天清水交替,持续3-5周)可构建慢性模型。
- 特点:操作简便、成模率高,病理表现与人类溃疡性结肠炎相似(结肠缩短、黏膜糜烂、隐窝结构破坏)。联合氧化偶氮甲烷(AOM)可构建结肠炎相关癌症模型。
-
TNBS/乙醇诱导法
- 步骤:经肛门灌注含2.5-5%三xiao基苯磺酸(TNBS)的40-50%乙醇混合液(剂量150mg/kg TNBS),3天后可见典型症状。
- 特点:需麻醉操作,病变集中于远端结肠,模拟Th1型免疫反应,适用于免疫机制研究。
-
DNCB诱导法
- 步骤:腹部皮肤涂抹2%二硝基氯苯(DNCB)致敏14天,随后结肠灌注0.2% DNCB溶液4天。
- 特点:结合皮肤致敏与肠道刺激,炎症反应持续至8周,适合长期病理观察。
二、复合因素模型
-
湿热型模型
- 步骤:高脂高糖饮食+白酒灌胃20天,叠加TNBS或免疫刺激(如福尔马林),形成湿热体质与肠道炎症结合的模型。
- 特点:模拟中医证候,伴随胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)升高,适用于中药疗效评价。
-
免疫复合物法
- 步骤:注射结肠组织匀浆与弗氏佐剂的混合液,诱导自身免疫反应。
- 特点:病理表现接近人类自身免疫性结肠炎,但操作复杂且周期较长。
三、模型评估指标
- 宏观指标:疾病活动指数(DAI)评分(体重下降、便血、粪便性状)、结肠长度缩短程度。
- 病理学检查:HE染色观察黏膜损伤、炎细胞浸润、溃疡深度;免疫组化检测COX-2、IFN-γ、VCAM-1等炎症标志物。
- 分子检测:ELISA或qPCR分析血清/结肠组织IL-1β、TNF-α水平。
四、方法选择建议
| 模型类型 | 适用研究 | 优缺点 |
|---|---|---|
| DSS急性模型 | 药物筛选、炎症机制 | 操作简单,但病变较表浅 |
| TNBS模型 | 免疫调节机制、Th1反应研究 | 病变局限且持久,需麻醉操作 |
| 湿热复合模型 | 中西医结合治疗评价 | 模拟证候,但造模周期较长 |
| DSS+AOM慢性癌变模型 | 结肠炎相关癌症机制 | 成本较高,需联合用药 |
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文献和实验大鼠麻醉后,背部脱毛,于 T9-T11 胸椎区域消毒,划约 2-3cm 纵行切口,咬除椎板,暴露硬脊膜,将大鼠固定于多功能鼠固定台,应用脊髓打击器撞击骨髓(打击高度 12mm,重量 10g)大鼠出现尾部痉挛性摆动,表明造模成功。造模后,对各组大鼠进行脊髓损伤的行为学评分,利用斜板实验评测动物脊髓损伤后神经功能恢复情况,分析在脊髓损伤不同时期的变化规律。
麻醉好的大鼠绑定在多功能脑立体定位仪上,沿正中线切开头部皮肤,暴露出骨膜,轻轻切开骨膜。纯双氧水擦拭骨面,以前囟为准,采用两点注射:右侧黑质致密部(SNc)、中脑腹侧被盖区(VTA)。 SNc:前囟后(5.0)毫米, 矢状缝右侧(1.5)毫米, 硬脑膜下(7.8)毫米; VTA:前囟后(4.6)毫米, 中线右侧(0.9)毫米, 硬脑膜下(7.3)毫米。 用牙科钻钻开颅骨,用5μL微量进样器将药物注入右侧纹状体(速度为1.0 mm/min),每孔4μL,注射速度为1μL/min,注射完毕后留针
大鼠俯卧位固定到手术台上,持续低剂量麻醉。消毒,沿右后肢大腿后外侧股骨干作一切口,暴露坐骨神经干及其远端分支,钝性分离肌肉,用玻璃分针分离出胫神经、腓总神经,分别用6-0丝线双重结扎胫神经、腓总神经,切断结扎远端,同时将神经断端远端剪掉2mm,注意保留腓肠神经,手术过程中应避免牵拉腓肠神经及其伴行的血管。操作结束后逐层缝合组织,再次碘伏消毒。
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