上海细胞划痕实验

细胞划痕

一、 细胞划痕实验原理 
肿瘤细胞在体外仍具有迁移的能力。细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后比较不同实验组中肿瘤细胞迁移的能力。

二、 细胞划痕实验目的 
用质粒Oct-4-EGFP转染后的A549细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析，考察质粒Oct-4-EGFP对A549细胞的迁移能力产生的影响。

三、 细胞划痕实验步骤 
实验共分以下4个主要步骤：
1. 质粒转染细胞：
准备A549细胞，转染前一天按照70-80%密度铺在6cm培养皿中。16h后，按照转染试剂说明书转染细胞（8μg质粒，20μL lipofectamine 2000转染试剂） 。转染24h后，重新铺盘，密度为30-40%。
2. 划线；
待细胞完全贴壁后，用200μL tip轻轻划线，垂直90度，用力均匀，确保划线处无细胞。
3. 细胞培养及拍照；
每隔3天换一次新鲜培养基。连续几天倒置显微镜下100X下拍照，记录细胞的迁移情况，直到细胞填满划痕处。
4. 统计分析。
划线两侧间距为average gaps（AGs），使用Image-Pro Plus软件分析各组细胞的AGs。

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