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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Annexin V-GFP/PI
- 供应商:
上海觅拓
- 规格:
20T/50T/100T
| 规格: | 20T | 产品价格: | ¥400.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥756.0 |
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥1188.0 |
产品简介:
Annexin V-GFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-GFP/PI Apoptosis Detection Kit)是用GFP标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
用带荧光染料GFP标记Annexin V,即Annexin V-GFP,便可用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单且直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
本试剂盒还提供了碘化丙啶(PI)染色液,PI不能通过完整的细胞膜,可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-GFP可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光,PI双染可以确定坏死细胞群。
综上所述,用Annexin V-GFP和PI染色后,正常的活细胞不被Annexin V-GFP和碘化丙啶染色;凋亡早期的细胞仅被Annexin V-GFP染色,PI染色呈阴性;坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-GFP和PI染色。
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。 图Annexin V 检测细胞凋亡原理二、试剂盒组份
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
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