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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
Annexin V-APC/PI Apoptosis Detection Kit产品规格20T|100T|50T
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
发货周期1~3天
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒价格
英文名称:Annexin V-APC/PI Apoptosis Detection Kit产品规格20T|100T|50T
产品规格:发货周期1~3天
发货周期:1~3天
碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将AnexinV-APC与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
5-基四氮唑烃基二基代胺/洁尔灭/苯扎铵/化苯烷铵/二基苄基烷基化铵/代(烃基二)胺/苄烷铵化物/化苯羟胺/化苄烷安铵/化苄二烷铵/苄烷铵/二基苄基(C8-18)烷基化铵/Benzalkonium chloride
1-BOC-4-啶酰肼酰基酰/N-酰基酰/3-氧-N-苯基酰胺/3-氧代-N-苯基酰胺/α-酰代酰/酰代酰/AAA/Acetoacetanilide
O-(叔基)-D-丝氨酸酰胺/醋酰胺/Acetamide
N-基吡啶双(三氟磺酰)亚胺盐盐酸三醇胺/三醇胺盐酸盐/2,2,2-次氮基三醇盐酸盐/Triethanolamine hydrochloride
3-酸盐酸羟胺/化羟胺/羟胺/羟基化铵/盐酸胲/羟基化胺/Hydroxylammonium chloride
2--6-吡啶-3-醇六亚基四胺/海克山明/乌/促进剂H/胺仿/四氮六环/促进剂H海克沙/六胺/Hexamethylenetetramine
N-苄氧羰基二胺盐酸盐二胺盐酸盐/盐酸二胺/二胺/盐酸二氨基烷/撑二胺/Ethylenediamine dihydrochloride
苯酸四基铵1-(3-二基胺基)-3-基碳二亚胺/1-(3-二氨基基)-3-基碳二亚胺/EDC/WSC
2-氨基-5-氧酰胺胺T/亚明T/氨砜钠/对苯磺酰胺钠/N--4-苯磺酰胺钠盐/Chloramine T trihydrate
2-氮杂双环[2.2.1]-5-庚烯-2-羧酸叔酯对胺盐酸盐/盐酸胺/1,4-胺盐酸/盐酸对氨/1,4-二氨/1,4-Phenylenediamine dihydrochloride
Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒价格TRIS-HC1三(羟基)基盐盐25克AR
Tris carbonate三羟基基盐10*10mg/支CP,99%
TRIS acetate salt三羟基基醋盐100克AR
Tripotassium phosphate trihydrate三水磷100克97%
Triphenylphosphine三膦10克BR,
Triphenylmethane1,1’,1’’-次基三100克99%
Triphenyl phosphite三基亚磷盐500克高,
Trimethylamine hydrochloride三盐盐100毫克高,
Trimethyl orthoacetate1,1,1-三基100克4N
Trimethoprim lactate salt2,4-二基-5-(3,4,5-三基基)嘧盐10克USP级,85%,845~988mcg/mg
Trimethoprim嘧1克USP级,2.5mg/ml,γ-射线灭菌
Triisooctylamine三异辛基5克高,
Triisoamylamine三(3-基基)25毫克高,
Trifluorothymidine曲胸甙1克高,
Triflic acid三1克99%
操作步骤(仅供参考):
1、Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配 Annexin V 使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g 离心 5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数
Annexin V 与PI双染检测细胞凋亡改进方案 标本:肺泡灌洗液 标本:外周血溶血后标记检测
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