禽波氏杆菌 PCR 试剂盒

产品简介：
波氏杆菌病是由禽波氏杆菌引起的一种细菌性传染病，该病主要造成鸡胚胎死亡。鸡波氏杆菌也可造成鸭、鹅等其它禽类发病，但成年种鸡基本无异常现象，个别出现拉绿便、眼流泪、气喘等症状。但种鸡所产种蛋孵化率降低、死胚增多，死胚多发生在 18 日龄前后，死胚率一般在 30%-40%，有的高达60%。同时，种蛋孵出的弱雏增多，弱雏率在 5%-20%，雏鸡多在 3-5 日龄发病，表现为呼吸困难，食欲降低或废绝，精神沉郁，呆立一隅，常急性死亡。因此快速灵敏检测禽波氏杆菌具有重要意义。本产品
就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增禽波氏杆菌，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	试剂一	1 mL（红盖）
超纯水	试剂二	1 mL（亮黄色）
禽波氏杆菌 PCR 引物混合液	试剂三	100 μL（白盖）
禽波氏杆菌 PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	试剂四	50 μL（黄盖）
使用手册	ZY-99047	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是禽波氏杆菌 PCR 阳性对照的1000 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
禽波氏杆菌 PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（禽波氏杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。  对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。