北纳创联马红球菌(阴性对照)

【求助】chip阴性对照pcr也有条带出现

liupeiyanxiaohai 小女子近来开始做chip，结果pcr后input的条带很亮没问题，只是阴性对照（加的是同种属的normal IgG）也出现了条带，而且和目的抗体的差不多，后来怀疑是交联时间太长（20min）随减为5min，10min还整了个没加抗体的做对照，结果还是加IgG和没加抗体的对照都有条带出现，怎样才能阴性对照没条带，还有就是超声怎样才能避免气泡的产生呢，每次超声都有大量气泡，求高人指点。 实验中抗体1ul，agroseA

[请教]如何解决血清抗原的阴性对照偏高的问题?

我做的间接ELISA，用猪血清作为包被抗原，兔抗体作为一抗，HRP－羊抗兔作为二抗。阳性的反应基本正常，而且抗体效价不错。可就是阴性对照老是很高，使用小牛血清封闭好想基本没有效果（我试过用pH7.4 的pbs和pH9.6 的cbs 稀释1%、5％、10％浓度的小牛血清，另外还有明胶）。以下是我昨天做的一个结果，一抗从1：12800稀释(阴性阳性均同)，抗原从1.25ug/ml开始包被，都是倍比稀释。1 2 3 4 5 63.027 3.046 3.008 2.765

ELISA 实验操作要点

(1) 显色 显色是 ELISA 中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。 OPD 底物显色一般在室外温或 37℃ 反应 20-30 分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使