siRNA对照

    siRNA对照是RNAi完整实验的重要组成部分，主要包括：转染对照、阳性对照、阴性对照、空白对照。对照产品将帮助科学家进行siRNA转染条件优化，验证基因沉默实验流程的准确性，对siRNA诱导的基因沉默效果进行特异性分析，保证RNAi实验的顺利完成。

转染对照：荧光标记无靶标 siRNA，借助荧光成像可有效检测siRNA 转染效率，可配合使用riboMONITOR®转染指示剂；
阳性对照：以内源基因（如GAPDH）或报告基因为靶标的siRNA，确认RNAi 实验操作的准确性；
阴性对照：验证siRNA 特异性可选择通用的阴性对照和scramble对照。

产品优势
1、阴性对照siRNA采用特殊设计，不靶向任何已知的人、小鼠、大鼠基因，无任何化学修饰，具有更低的脱靶效应；
2、阳性对照siRNA经特异性设计及实验验证，是专门针对内源性基因或报告基因而设计siRNA的；
3、转染对照siRNA采用Cy3荧光标记，无化学修饰，荧光强度高，具有良好的抗淬灭性能，尤其适合细胞实验中的转染效率检测，可用荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪进行检测。

参考下表可帮助您确定哪种RNAi对照符合研究需求。

阴性对照

    阴性对照分为两类，通用型阴性对照和Scramble阴性对照。
    siR-Ribo™ Negative Control阴性对照就是通用型阴性对照，使用软件分析和实验验证，与人、小鼠、大鼠等物种的基因同源性更小，是一个通用性较强的阴性对照，正式实验统计中常用该对照进行siRNA沉默效率计算。

Scramble阴性对照通常将相应的siRNA靶序列随机打乱并重新组合，使得其与靶序列的同源性较低，一般仅适用于该实验的阴性对照，需定制。

阳性对照

针对内源性基因或报告基因设计的阳性对照siRNA，用于确认RNAi实验的可行性。

图2 siR-Ribo™ Positive Control (h-ACTB)阳性对照siRNA沉默效率   以50nM终浓度转染A549细胞系48小时后，采用qPCR方法检测ACTB的RNA表达水平显著降低。

图3 siR-Ribo™ Positive Control (h-GAPD)阳性对照siRNA沉默效率   以50nM终浓度转染A549细胞系48小时后，采用qPCR方法检测GAPD的RNA表达水平显著降低。

 

转染对照

转染对照siRNA是荧光标记的无靶标siRNA，借助荧光成像系统可有效检测siRNA转染效率。

图4 siR-Ribo™ Transfection Control (Cy3)转染A549细胞6h后检测结果(200x荧光显微镜)
A：转染对照siRNA； B：Hoechst； C：Overlay

图5 siR-Ribo™Transfection Control (Cy3)转染Hela细胞12h后检测结果(激光共聚焦显微镜)
A：转染对照siRNA； B：Hoechst； C：Overlay