T4 RNA连接酶2 ,截短型

通用 miRNA 克隆接头
#S1315S   0.83 nmol    ¥2,109

T4 RNA连接酶2，截短型(T4 RNL2 截短型)可特异性地将DNA或RNA的预腺苷酰化5´ 末端连接到RNA 3´ 末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷酰化底物。T4 RNL2截短型的表达来自E. coli 质粒，该质粒编码T4 RNA连接酶2基因的前249个氨基酸。与全长的T4 RNA连接酶2不同，T4 RNL2截短型不能将底物的5´ 末端腺苷酰化，因此无法将RNA或DNA的5´ 磷酸末端连接到RNA3´端(1-3)。该酶，即RNL2，可用于microRNAs克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷酰化的引物，因此，可以降低连接背景(4-6)。

携带T4 RNA连接酶2截短型基因的重组E.coli 菌株。

1X T4 RNA 连接酶 2，截短型反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C), 2 mM MgCl₂ , 1 mM DTT, 400 μM ATP]，16°C温育。

经检测每批产品均无单链和双链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶以及磷酸酶的污染。

1单位指20μl反应体系中，37°C条件下，30分钟内能将50%的17-mer RNA连接到预腺苷酰化23-mer DNA末端所需的酶量。退火后17和23-mer将首先形成互补的40-mer DNA。

                                            5´App
FAM 5´-CUUUUUCCCCUCTG CGG CATAGAAACCCACGCAAAGCCC -3´
       3´-GAAAAAGGGGGAGCGCCGTATCTTTGGGTGCGTTTCGGG-5´

红色 = DNA
蓝色 = RNA
ppA = 预腺苷酰化末端（连接区域）

1X T4 RNA 连接酶 2（截短型）反应缓冲液，0 4 μg 的 23-mer、17-mer 和 40-mer RNA 等摩尔混合物。37°C 温育 30 分钟，连接产物在 20%的变性聚丙稀酰胺凝胶电泳上检测。

5,000 units/ml。

加入 25% PEG 8000 和 16°C 条件下延长温育时间都可以提高连接效率。

(1) Ho, C.K. et al. (2004) Structure , 12, 327–339.
(2) Ho, C.K. and Shuman, S. (2002) Proc. Natl.Acad.Sci. USA , 99, 12709–12714.
(3) Nandakumar, J. et al. (2004) J. Biol. Chem. , 279, 31337–31347
(4) Pfeffer, S. et al. (2005) Nat. Meth. , 2, 269–276.
(5) Chen, P.Y. et al. (2005) Genes and Dev. , 19, 1288–1293.
(6) Aravin, A. and Tuschi, T. (2005) FEBS Letters , 579, 5830–5840.