抗兔IgG（完整分子）?胶体金抗体 山羊抗，G7277-0.

蛋白质免疫检测技术服务

，通过预染蛋白marker来确定电泳停止时间。 （4）  湿转法，转膜条件：300mA恒流；0.45um孔径PVDF膜，转膜时间1h。转膜完成后丽春红染色试剂对膜进行染色，观察转膜效果。 （5）  封闭：将膜完全浸没于5%BSA-TBST中，水平摇床孵育2h（RT）。 （6）  一抗孵育：5%BSA-TBST稀释一抗， 4℃水平摇床孵育过夜。 （7）  次日，洗膜：TBST洗3次，每次10min。 （8）  二抗孵育：5%BSA-TBST稀释二抗：山羊抗兔,山羊抗鼠IgG（H+L）HRP

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

（抗体的体积至少要覆盖膜表面，防止干燥。）。 一抗可回收再次使用（如连续使用放置4?C，否则放置-20?C）。 洗去一抗：25℃条件下，摇床转速为75转/分钟，用PBST洗膜3次，每次在恒温摇床上振荡10分钟。 3.5 二抗结合 加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔或抗鼠IgG (1:3000，制备时封闭液和PBST的比例为1:1)，37℃，60转/分钟，在恒温摇床上振荡60分钟。 洗去二抗：25℃条件下，摇床转速为75转/分钟，用PBST洗膜3次，每次在恒温摇床上振荡10分钟

免疫火箭电泳技术

含量。 二、试剂（以apob为例） 1、琼脂糖。 2、巴比妥钠缓冲液（μ=0.05，ph=8.6）:巴比妥钠10.30g，巴比妥1.84g、甘氨荎1.0g、peg 60004g，加900ml水加温助溶，待冷，加1mol/l调ph至8.6，混匀，转入1000ml容量瓶内，再加水到刻度，测试ph后装瓶待用。 3、羊抗人apob血清（效价1：128以上）。 4、apob标准血清。 5、固定液：1%鞣酸或10%三氯醋酸。