胸腺HE染色实验

一、实验步骤（以胸腺石蜡切片为例）

1. 样本固定与处理

   • 新鲜胸腺组织需立即固定于10%中性福尔马林（pH 7.0-7.4）中12-24小时，避免组织自溶。
   • 固定后沿矢状面切开，选取包含皮质和髓质的区域规范取材，确保结构完整性。

2. 石蜡包埋与切片

   • 梯度脱水：依次用70%、85%、95%、100%乙醇脱水，每级2小时，二甲苯透明后浸蜡。
   • 包埋时注意调整组织方向，使切面垂直于胸腺小叶结构。
   • 切片厚度推荐3-4 μm，过厚易导致细胞重叠，影响髓质区Hassall小体观察。

3. 脱蜡与水化

   • 脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各浸泡10分钟（若使用自动染色机可缩短至3-5秒）。
   • 梯度水化：100%乙醇（两次）→95%→85%→75%乙醇，每级5分钟，蒸馏水终止。

4. 苏mu精染色与分化

   • 浸入苏mu精染液5-15分钟（时间依染色液浓度调整），流水冲洗15-30分钟。
   • 分色：1%盐酸酒精分化2秒，显微镜下控制至淋巴细胞核呈深蓝色而胞质无色。
   • 蓝化：0.75%氯化铵溶液或饱和碳酸锂处理10秒，增强核对比度。

5. 伊红复染与脱水

   • 伊红染色1-5分钟，胸腺髓质中上皮细胞胞质需染成粉红色，可滴加1-2滴冰cu酸增强着色。
   • 梯度脱水：70%→85%→95%→100%乙醇，每级2分钟，避免伊红褪色。

6. 透明与封片

   • 二甲苯透明10分钟，中性树胶封片，盖玻片需覆盖整个组织区域，避免气泡。