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- 2025年07月12日
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通用生物（安徽）股份有限公司
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sgRNA、shRNA合成+转染级质粒抽提
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文献和实验设计了 sgRNA 之后怎么办呢？还是这篇文章先讲一下这里的框架首先是实验设计Experimental design1. Target selection for sgRNA--选择靶点详情见：CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计 https://www.jianshu.com/p/ 8222f449cb442. Approaches for sgRNA construction and delivery.sgRNA 的合成和投递有两种方式：A）PCR；B）单独的 sgRNA
那么有了这些 Cas9 相关技术，我们能做哪些方面的基因功能研究呢？ 从目前的研究成果来看，最奔放的莫过于传说中的“Genome-Scale”的筛选了。“Genome-Scale”怎么翻译呢？ “基因组规模”！看上去吓我一跳，常识中说，人类的 2-3 万个基因隐藏在约 30 亿个碱基对中，基因组规模筛选？！这不就是大海捞针嘛！可是人家真的就敢捞，为什么？还得归功于 sgRNA 设计合成的简便性。2014 年，Cas9 技术的发明人张峰博士在Science 上发表了一篇文章，设计了针
CRISPR / Cas的美丽编辑系统,虽然单指南RNA (sgRNA),简单的设计和合成,是决定整个工具的目标属性,Cas9——一个稳定的,不变的元素——只负责一件事:切割DNA链的地方它是引导。我们常常过于关注单一引导rna的优点和局限性，以至于忘记了Cas9本身有一个重要的限制:只有在sgRNA识别的DNA序列旁边存在所谓的protospacer邻近motif (PAM)时，它才会切断该序列。PAM是一种特殊的短序列:最常用的野生型化脓性链球菌Cas9 (SpCas) PAM使用NGG
