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- 2025年07月12日
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通用生物（安徽）股份有限公司
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sgRNA、shRNA合成+转染级质粒抽提
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文献和实验设计了 sgRNA 之后怎么办呢？还是这篇文章先讲一下这里的框架首先是实验设计Experimental design1. Target selection for sgRNA--选择靶点详情见：CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计 https://www.jianshu.com/p/ 8222f449cb442. Approaches for sgRNA construction and delivery.sgRNA 的合成和投递有两种方式：A）PCR；B）单独的 sgRNA
那么有了这些 Cas9 相关技术，我们能做哪些方面的基因功能研究呢？ 从目前的研究成果来看，最奔放的莫过于传说中的“Genome-Scale”的筛选了。“Genome-Scale”怎么翻译呢？ “基因组规模”！看上去吓我一跳，常识中说，人类的 2-3 万个基因隐藏在约 30 亿个碱基对中，基因组规模筛选？！这不就是大海捞针嘛！可是人家真的就敢捞，为什么？还得归功于 sgRNA 设计合成的简便性。2014 年，Cas9 技术的发明人张峰博士在Science 上发表了一篇文章，设计了针
CRISPR/Cas9文库2.0升级版—助你快速、精准地做基因筛选
Cas9蛋白是一种以RNA为导向的DNA内切酶，是一种操纵基因组的强大工具[1]。更多的研究者获益于基于CRISPR的遗传筛查，对已确定的基因有更多基因功能表型的认识[2]。早在2013年，海外的两个研究团队分别在Science杂志同一期上发表了CRISPR文库的相关研究[3,4]。这是首次关于CRISPR文库的研究，显示出比shRNA文库更有效的筛选效果。但在文库设计初始，对sgRNA活性规则知之甚少，而非活性和非特异性的sgRNA会降低文库有效基因的覆盖率及靶基因的准确
