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sgRNA、shRNA合成+转染级质粒抽提
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文献和实验设计了 sgRNA 之后怎么办呢?还是这篇文章先讲一下这里的框架首先是实验设计Experimental design1. Target selection for sgRNA--选择靶点详情见:CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计 https://www.jianshu.com/p/ 8222f449cb442. Approaches for sgRNA construction and delivery.sgRNA 的合成和投递有两种方式:A)PCR;B)单独的 sgRNA
那么有了这些 Cas9 相关技术,我们能做哪些方面的基因功能研究呢? 从目前的研究成果来看,最奔放的莫过于传说中的“Genome-Scale”的筛选了。“Genome-Scale”怎么翻译呢? “基因组规模”!看上去吓我一跳,常识中说,人类的 2-3 万个基因隐藏在约 30 亿个碱基对中,基因组规模筛选?!这不就是大海捞针嘛!可是人家真的就敢捞,为什么?还得归功于 sgRNA 设计合成的简便性。2014 年,Cas9 技术的发明人张峰博士在Science 上发表了一篇文章,设计了针
类器官基因敲低全攻略:慢病毒 / AAV 怎么选?成体 / 多能干细胞来源操作差异一文讲
层面:shRNA、siRNA、CRISPRi属于“怎么降低目标基因表达”,慢病毒、AAV、电转等属于“怎么把敲低系统送进细胞”。 1. RNA干扰:shRNA / siRNA shRNA和siRNA都通过RNA干扰降低目标mRNA水平。shRNA可借助慢病毒等载体持续表达,更适合需要长期维持敲低的类器官;siRNA作用时间较短,更多用于瞬时敲低和短周期实验。 2. CRISPR干扰:CRISPRi CRISPRi使用失去切割活性的dCas9与KRAB等转录抑制结构域融合,在sgRNA引导下结合
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