NanoDrop Lite 分光光度计

采用NanoDrop分光光度计测量微容量蛋白浓度

赛默飞世尔科技公司推出了一款既可提供微量分析,又配备有比色皿的NanoDrop 2000c紫外-可见分光光度计。它把所需样品容量降至新低（0.5-2μL）,且同时具有微样底座和比色皿的能力使得分光光度计能提供最宽的浓度范围。 0:00 纳微量2000c 分光光度计- 微量体积蛋白浓度的测定0 0:42 内容简介42 1:02 纳微量 2000c 分光光度计62 2:28 使用吸光度280法测定微量蛋白质浓度148 5:51 使用比色分析法测定微量蛋白浓度351

经验优化与高级技巧篇

1. Qubit 定量与紫外分光光度计定量的区别 在常规实验室对核酸定量的检测中，常会用到紫外分光光度计（或 Nanodrop）和 Qubit 两种检测方法，二者在原理、准确性、操作难易等方面存在显著差异。 ①首先两者原理不同，紫外分光光度计基于核酸的紫外吸收特性来实现对核酸的定量：核酸（DNA/RNA）在 260nm 波长处有特异性吸收峰，且吸光度与核酸浓度成正比；Qubit 基于荧光染料与核酸特异性结合的原理来实现对核酸的定量，两者结合后荧光强度与核酸浓度成正比，通过标准曲线校准实现定量

原位微量BCA蛋白定量法

比色杯在Epoch分光光度计上检测得到的。结果&讨论： 反应动力学典型的BCA法检测方案需要体积比为20:1的BCA缓冲液和蛋白样品，NanoDrop 技术手册使用的是4ul蛋白质样品加到80ulBCA缓冲液中。即使在标准曲线的高浓度端（例如： 2mg/ml BSA），BCA工作缓冲液的活性成分的摩尔量明显超过参与反应的蛋白质（见表1）。同样也超过双缩脲反应的结合位点（肽键，半胱氨酸，胱氨酸，色氨酸，酪氨酸），但是这浓度的差异也是有一定限度的，因为蛋白质的三维结构会阻碍Cu2+和BCA的进入这些位点，形成