Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒（绿色）

产品信息
　　Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 8的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 8 是一种Caspase蛋白，CASP8基因所编码。在神经元变性疾病中，例如亨廷顿综合症，caspase 8扮演着重要角色。Caspase 8已被证明具有底物选择性，其肽基序为Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。该试剂盒使(Ac-IETD)2-R110作为荧光指示器来检测caspas-8的活性。通过caspas-8的切割R110肽产生强绿色荧光，其发射光在520 nm和530 nm之间，激发光为480 nm和500 nm之间。这种特性使得试剂盒能适合于FITC滤光器。
产品优势
　　本试剂盒提供所有必需组分和最佳操作流程。该实验结果稳定，快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-8的活性还能筛选caspas-8的抑制剂。
技术资料
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
订购信息

产品组分

实验方案
1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞。
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）。
3.在室温下孵育30分钟至1小时。
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（截止= 515 nm）。
5.将50μLCaspase8底物（组分A）加入10mL测定缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Caspase 8工作溶液（溶液需避光保存）。
【注】：Caspasae 8工作液不稳定，请及时使用。 
操作步骤
1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。
2.将细胞板在5％CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间（对于用喜树碱或星形孢菌素处理的Jurkat细胞，4-6小时）以诱导细胞凋亡。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。
4.将板在室温下孵育30分钟至1小时，避光。
【注】：如果需要，在室温下加入Caspase 8工作溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂，以确认对caspase 8样活性的抑制作用。
5.以800rpm离心细胞板（特别是对于非贴壁细胞）2分钟（制动关闭）。
6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光增加。
数据分析
   
图1.使用Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的caspase 8活性
 
　　在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天以200,000个细胞/90μL/孔接种Jurkat细胞。 用或不用20μM喜树碱处理细胞4小时。 加入半胱天冬酶8工作溶液（100μL/孔）并在室温下温育1小时。 使用FlexStation 酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止值= 515nm）下测量荧光强度。
注意事项
该产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。