- ￥330 - 550
- 李记生物Life-iLab
- AC12L543
- 上海
- 2026年01月05日
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- 详细信息
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- 英文名：
Cell Cycle and Apoptosis Kit
- 保质期：
24个月
- 供应商：
李记生物
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T/100T
| 规格： | 50T | 产品价格： | ￥330.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100T | 产品价格： | ￥550.0 |
产品描述
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即 PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。
碘化丙啶(Propidium，简称 PI)是一种双链 DNA 的荧光染料。碘化丙啶和双链 DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链 DNA 的含量成正比。细胞内的 DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行 DNA 含量测定，然后根据 DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假设 G0/G1 期细胞的荧光强度为 1， 那么含有双份基因组 DNA 的 G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为 2，正在进行 DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1-2 之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生 DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组 DNA 片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于 1，在流式检测的荧光图上出现所谓的 sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂， 产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。
订购信息
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
价格 |
| 细胞周期检测试剂盒 (Cell Cycle and Apoptosis Kit) |
AC12L543 |
50T |
380 |
| 细胞周期检测试剂盒 (Cell Cycle and Apoptosis Kit) |
AC12L544 |
100T |
680 |
产品组分
|
组分 |
50T |
100T |
|
A.染色缓冲液 |
25 mL |
50 mL |
|
B. 碘化丙啶染色液 (20×) |
1.25 mL |
1.25mL*2 |
|
C. RNase A (50×) |
0.5 mL |
1 m |
运输与保存
蓝冰运输。-20℃保存；组分B需避光保存于-20℃。有效期24个月。
使用方法
1.细胞样品的准备：
对于贴壁细胞：
（1）首先小心收集细胞培养液到离心管内备用。
（2）用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
（3）再次收集到离心管内，用1000 g 左右离心 3-5 min，沉淀细胞。
注：对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
（4）小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1 mL 冰浴预冷的 PBS，重悬细胞，并转移到 1.5 mL 离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
对于悬浮细胞：
（1）用1000 g 左右离心 3-5 min，沉淀细胞。注：对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
（2）小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1 mL 冰浴预冷的 PBS，重悬细胞，并转移到 1.5 mL 离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2.细胞固定：
（1）加入 1 mL 冰浴预冷 75-80%乙醇，轻轻吹打混匀，对于易成团的细胞，要一边加入乙醇一边震荡混匀。如果细胞株本身极易成团，可以先将细胞充分重悬在250 μL 的 PBS 中，一边逐滴加入 750 μL 的无水乙醇。乙醇终浓度控制在 75%左右即可，PBS 体积及无水乙醇体积可按比例调整。注：切记是先重悬在 PBS 中，绝对不能重悬在培养基中再加无水乙醇！
（2）将 75-80%的乙醇重悬的样品置于-20ºC，固定过夜。（如着急检测，-20℃ 固定 1-2 h 也可以进行检测；乙醇固定的样品可以在-20℃保存1个月）
（3）1000 g 左右离心 3-5 min， 沉淀细胞。注：对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
（4）小心吸除上清，可以残留约 50 μL 左右的 75-80%乙醇，以避免吸走细胞。加入约 1 mL 冰浴预冷的 PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，尽可能将上清去除干净。
3.碘化丙啶染色液的配制：
参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：
| 内容 | 一个样品 | 6 个样品 | 12 个样品 |
| 染色缓冲液 | 0.5 mL | 3 mL | 6 mL |
| 碘化丙啶染色液(20×) | 25μL | 150 μL | 300 μL |
| RNase A (50×) | 10 μL | 60 μL | 120 μL |
| 最终体积 | 0.535 mL | 3.21 mL | 6.42 mL |
【注】：配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以 4ºC 保存，宜当日使用。
4.染色：
（1）每管细胞样品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液， 缓慢并充分重悬细胞沉淀，室温避光孵育 15-30 min。（2）随后可以 4ºC 或冰浴避光存放，染色完成后宜在 24 小时内完成流式检测（建议能在当日完成流式检测）。
5.流式检测和分析：
用流式细胞仪在 535 nm 激发波长， 615 nm 发射波长的通道检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析和光散射分析。
注意事项
- 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
- 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
- 碘化丙啶对人体有刺激性，请注意适当防护。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验细胞周期（cell cycle）是从一个细胞的任何一个分期阶段到子细胞的同等阶段中的各种事件。从一个新产生的细胞到它分裂产生子细胞这一过程称为细胞周期，它可以分成为四个阶段：M期、S期、G1 期和G2 期。M是分裂期，通常是细胞周期中最短的时期，约占整个时期的5~10%的时间。DNA的合成发生在S期（synthesis）。G1 （gap1 ）和G2 （gap2 ）是S期和M期之间的两个间隙期。G1 、S、、 G2 、 合称为间期（interphase），即两个分裂期之间的时期
以有丝分裂方式增殖的细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程。这一过程周而复始。细胞周期是50年代细胞学上重大发现之一。在这之前认为有丝分裂期是细胞增殖周期中的主要阶段，而把处于分裂间期的细胞视为细胞的静止阶段。1951 年霍华德等用32P-磷酸盐标记了蚕豆根尖细胞，通过放射自显影研究根尖细胞DNA合成的时间间隔,观察到32P之掺入不是在有丝分裂期，而是在有丝分裂前的间期中的一段时间内。发现间期内有一个DNA合成期(S期)，32P只在这时才掺入到DNA;S期和分裂期（M期）之间有一个间隙
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