- ￥500 - 5000
- Elabscience
- E-CK-A420
- 中国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit (Green, FITC)
- 保质期：
1 年
- 供应商：
北京百奥创新科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款灵敏度高且能快速简便地检测细胞凋亡的产品。本试剂盒可通过流式细胞仪来进行悬浮细胞、贴壁细胞的流式凋亡检测。
检测原理
细胞在发生凋亡时，会激活一些特异性的 DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA。使得凋亡细胞的 DNA 被切割成 180~200bp 片段，在琼脂糖凝胶上通常以 180~200bp 的阶梯状迁移。细胞经过固定破膜后，TdT 酶 （脱氧核糖核酸末端转移酶）将荧光标记的 dUTP 连接到细 胞断裂 DNA 暴露的 3'-OH 末端，通过流式细胞仪检测 dUTP 偶联物发出的荧光信号，从而来检测晚期凋亡。
产品组分
基本信息
| 应用类型 | 细胞凋亡-DNA片段化 |
| 检测方法 | 荧光 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 检测时间 | 2.5-3 hours |
| 检测仪器 | 流式细胞仪 |
| 荧光 | FITC |
| Ex/Em (nm) | 490/530 |
| Channel set | FITC |
| 自备试剂 | PBS(含1%BSA)缓冲液(PH7.2～7.4) |
| 保存温度 | -20°C, shading light |
| 运输条件 | 冰袋 |
| 保质期 | 12 months |
检测样本类型
悬浮细胞
贴壁细胞
自备试剂及仪器
1) 试剂 PBS（含 1%BSA）缓冲液（pH7.2～7.4）。
注：PBS（含 1%BSA）缓冲液（pH7.2～7.4），目的是减少 离心造成的细胞损失。
2) 仪器 流式细胞仪、离心机。
实验流程
阴性对照：排除细胞本底、药物处理等原因产生的荧光 背景以及非特异性染色造成的影响。准备一组细胞作为 阴性对照，第 8 步标记工作液配制时不添加 TdT 酶，其余操作与实验组相同。
实验步骤
1. 收集细胞并进行计数，每组取 1×106个细胞，300×g 离 心 5 min，弃上清。
注：若样本为贴壁细胞，凋亡细胞会有部分悬浮于上清 中，上清中的细胞也要收集。
2. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重悬细胞，加入 200 μL Fixation Buffer，室温固定 60 min（推荐使用摇转方式， 或每 15 min 混匀一次）。
3. 加入 1mL PBS（含 1%BSA），600×g 离心 5 min，弃上 清。
4. 加入 200 μL Permeabilization Buffer，冰上破膜 10 min。
注：破膜温度过高或者时间过久会导致细胞破碎，因此 建议 Permeabilization Buffer 解冻后放置在 4°C，待使用 前取出；另外破膜时间最长不要超过 15 min。
5. 加入 1~2 mL PBS（含 1%BSA）终止破膜，轻轻吹打混 匀后，600×g 离心 5 min，弃上清。
6. 加入 200 μL TdT Equilibration Buffer，轻轻吹打混匀， 37°C 平衡 15 min。
7. 600×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞沉淀。
8. 按照分组参考下表配制标记工作液，每个样本加入 100 μL 反应液（充分混匀，现配现用）。
② Labeling Solution 使用前，请置于冰上溶解，待完 全溶解后离心，用枪头吹打混匀。
③ TdT Enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°C， 使用前取出，使用后立即放回。
④ 配制标记工作液时，建议不要涡旋。
9. 37°C 避光孵育 60 min（每 20 min 轻轻摇晃混匀细胞）。
10. 加入 1 mL Stop Solution 轻轻吹打混匀，室温静置 5 min， 加入 300~500 μL PBS(含 1%BSA)，600×g 离心 5 min， 弃上清。
11. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重悬细胞，上机检测。
检测
在流式细胞仪中选择合适的通道检测。
注：为避免荧光淬灭，请尽快检测。
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。
2. 请注意安全事项，遵守实验室试剂操作规范操作。
3. 用于该试剂盒的检测样本最低细胞数目不低于 5×105个。
4. 实验中需要重悬细胞的步骤，用移液器轻轻吹打细胞 10~20 次，吹 打时请勿将枪头中的液体完全吹出，避免造成细胞损伤和产生过多 的气泡。
5. 离心去上清的操作要小心谨慎，避免造成细胞损失。
6. Labeling Solution 和 TdT Enzyme 应避免反复冻融和涡旋操作
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流式课堂 | 细胞带有 GFP 荧光时，如何进行流式凋亡分析？
随着生物研究进入基因时代，转染技术的应用越来越广泛。在此过程中，通常会引入 GFP（绿色荧光蛋白）标签，去验证转染是否成功。 在之前的流式课堂中，我们曾多次提到过流式配色问题。今天，就来带大家看看，带有 GFP 标签的细胞，在流式凋亡检测中，应该如何配色和分析结果。 一、如何选择试剂盒 挑选试剂盒时，需要选择干扰少的荧光组合。GFP 的激发/发射波长为 488/510，通常在流式细胞仪中的检测通道为 FL1。因此，我们不能选择荧光标签为FL1检测通道的凋亡检测试剂盒，如 AF488
：敏感度高，适合于检测少量样本，小部分凋亡细胞。如临床活组织检测。 Fasta921 zhaohu552211 wrote:感谢大家！我现在做的是大鼠的肝脏组织，不是细胞，在这种情况下我可以做AnnexV嘛？我知道AnnexV可以做细胞的，如果可以做组织的话，我定那家的试剂盒，具体要注意什么？ 听说这个电泳很难掌握条件！再次感谢大家！ 兄弟，貌似做AnnexinV国产很多不能做组织，呵呵！我没做过组织，没经验，提供点资料看看！美国ADL Annexin V-FITC & PI凋亡检测试剂盒
的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
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