- ￥1536
- 齐源
- QYS-23017
- 国产
- 2025年09月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 英文名：
Mitochondrial respiratory chain complex III assay kit
- CAS号：
微信号19512293839
- 保质期：
qq1300030701
- 供应商：
齐源生物
- 保存条件：
2-8℃低温保存
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测定原理： 与氧化型细胞色素 C 不同，还原型细胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收，因此 550nm 光吸收 增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
样本的前处理： 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆 器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选 做）。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1） 工作液的配制：将试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（ 其 它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2） 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、25μL 试剂六和 200μL 工作液，立 即混匀，记录 550nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
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文献和实验指在生物体氧化还原中，参与电子传递的一系列氧化还原酶系，通常系指通过线粒体等的分子态氧氧化 NADH以及琥珀酸等的酶系。其电子传递顺序如下： O3 ←细胞色素（ a a3 ）复合体←细胞色素 c ←细胞色素 c1 但该顺序也表示每个前面物质的还原型将其后面物质的氧化型还原，这样反复进行，最终将分子态氧氧化成水。在呼吸链中有非血红素铁和铜原子等参与。在细胞内呼吸链系存在于线粒体的内膜上，各阶段的酶及因素可与不溶
广义的细胞色素 c是含有血红素 c的细胞色素之总称。通常是指主要存在于高等动植物、酵母、霉菌等线粒体中的细胞色素 c，起着传递电子的作用。为分子量约 1.3万的碱性蛋白质，还原型的吸收带为 550、 520、 415毫微米，氧化型为 407毫微米。α 因此很早便被研究，并获得结晶。不仅一级结构而且立体结构也已清楚（图 1）。其结构基本上是生物界共有的。由细胞色素 c氧化酶〔细胞色素（ a＋ a3 ）复合体〕氧化。在呼吸链中从细胞色素 c开始接受电子，各种还原酶都已清楚
酸脱氢酶催化又氧化生成草酰乙酸并释出NADH，还原当量从复合体I进入呼吸链经CoQ、复合体Ⅲ、Ⅳ传递，最image/005061360后给氧，所以仍可产生3分子ATP，与在线粒体内产生的NADH氧化相同。与此同时线粒体内的α酮戊二酸由于与苹果酸交换而减少，需要补充，于是在转氨酶作用下由谷氨酸与草酰乙酸进行转氨基反应，生成α酮戊二酸和天冬氨酸，天冬氨酸借线粒体膜上的谷氨酸天冬氨酸 载体 转移系统与胞液的谷氨酸交换，从而补充了线粒体内谷氨酸由于转氨基作用而造成的损失，进入胞液的天冬氨酸再与胞液
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