BCECF AM（pH荧光探针, 5mM）

共聚焦荧光探针标记方法

（一）BCECF测定pH值 1. 储存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分装后，－20℃避光保存。 2. 染色步骤 将培养细胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入BCECF-AM（终浓度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。激光扫描共聚焦显微镜观察。 （二）SNARF-1定量比率测定pH值 1． 储存液配制　SNARF溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分装后，－20℃避光

固相pH梯度等电聚焦分析讨论

固相pH梯度的优缺点 固相pH梯度可窄至pH0.1的范围，因此分辨率极高，可达0.001pH；pH梯度稳定，不漂移；灵活性大，可随意选择pH梯度和斜率；重复性好；加样容量大；样品中盐的干扰小；对碱性蛋白质也能很好的分离，无边缘效应，故可用很窄的胶条（如5mm宽）聚焦，特别适合于双向电泳的第一相，但固相pH梯度灌胶技术复杂，只能使用聚丙烯酰胺凝胶，电泳时候需要高电压，电泳时间长，窄范围pH测定困难，只能计算。 pH范围的选择 固相pH梯度分辨率高，故使用预窄pH范围的分离，对未知样品，应

共聚焦激光扫描显微镜的应用及荧光探针

体的pH则在4.5～6.0之间。根据检测对象pH的不同将荧光探针分为用于偏中性和酸性两类。常用于偏中性pH即细胞胞浆pH检测的荧光探针有SNARF类(SNARF-1、SNARF-calcein)、SNAFL类(SNAFL-1、SNAFL-calcein)、BCECF等，这些探针均为疏水性探针，须使用其AM形式。FITC-dextran则适用于pH范围4～6之间，如溶酶体pH的检测，该探针也不能透过质膜，但可通过细胞胞饮作用进入溶酶体，因此应选择分子量稍小的Dextran(葡聚糖)。 5． 细胞