外泌体荧光标记

| 应用场景一

来自中国药科大学在Mol Cancer（IF=27.7）上发表了题为"The incorporation of acetylated LAP-TGF-β1 proteins into exosomes promotes TNBC cell dissemination in lung micro-metastasis"的研究性论文，乳腺癌仍然是女性中较常见的恶性肿瘤，其中三阴性乳腺癌（TNBC）是较具侵袭性的亚型。本研究揭示了三阴性乳腺癌（TNBC）肺转移灶来源的外泌体中富含的乙酰化LAP-TGF-β1蛋白在重塑肺血管微环境、促进TNBC肺转移中的关键作用。研究发现，与正常细胞相比，TNBC肺转移灶外泌体中LAP-TGF-β1含量显著升高，且在低剂量下即可通过与HSP90A的相互作用并依赖TIP60介导的K304位点乙酰化，被高效装载到外泌体中。这些外泌体通过破坏肺血管内皮细胞的紧密连接蛋白ZO-1，增加血管通透性，重塑肺血管微环境，从而促进TNBC细胞的肺部外渗和定植。此外，联合抑制HSP90A和TIP60可显著降低外泌体中LAP-TGF-β1的含量，有效抑制TNBC肺转移，为TNBC肺转移的治疗提供了新的靶点和策略。

图 肺转移性 TNBC 衍生的外泌体改变肺血管生态位。（A）小鼠外泌体注射后器官组织的示意图。（B） 流式细胞术分析描述了 231 个 LuT3 外泌体的肺驻留细胞摄取。（n = 5） 的（C） 小鼠肺样品中 231 个 LuT3 外泌体（绿色）与 S100A4（成纤维细胞）或 CD31（内皮细胞）的 IF 共染色。比例尺：50 μm。（D） 用 PKH67 标记的外泌体（绿色）处理 LuEC 24 小时，使用鬼笔环肽（红色）和 DAPI（蓝色）复染。比例尺：20 μm。

| 应用场景二

来自中山大学的研究者们在《Molecular Cancer》杂志上发表了题为“Exosome circATP8A1 induces macrophage M2 polarization by regulating the miR-1-3p/STAT6 axis to promote gastric cancer progression”的文章胃癌是全球第五大常见癌症，也是癌症相关死亡的第三大原因。通常在晚期才被诊断出来，而这时候已经发生了淋巴结转移和远处器官转移，预后较差。根据过往研究报道，外泌体作为癌细胞和肿瘤微环境之间交流的媒介，circRNA在胃癌发展中起到重要调控作用，但它们在巨噬细胞功能调控的作用还不清楚。作者从健康人和GC患者的血浆中都分离出了外泌体。重要的是，胃癌组织中 circATP8A1 的高表达与 GC 患者较差的预后明显相关，相关性分析表明 circATP8A1 的表达与临床病理特征相关。为研究外泌体 circATP8A1 促进 M0 巨噬细胞向 M2 极化，作者用 PKH67 对外泌体进行染色，并用荧光检测法评估巨噬细胞对外泌体的吸收情况。结果显示，处理 2 小时后，外泌体开始进入巨噬细胞（绿色荧光），6 小时后，相当数量的外泌体进入巨噬细胞。在过表达 circATP8A1 的 SGC7901 细胞中，STAT6 途径而非 STAT3 在外泌体介导的巨噬细胞 M2 极化中发挥作用。   

图 外泌体 circATP8A1 促进 M0 型巨噬细胞向 M2 型极化。A 使用 PKH67 和 DAPI 进行了免疫荧光染色，在外泌体处理后 2 小时和 6 小时如图所示。B & C 通过 qPCR 检测 M1 型表型极化标志物 CD80 和 CD86。D & E 通过 qPCR 检测 M2 型表型极化标志物 CD163 和 CD206。F–H 通过 qPCR 检测 CircATP8A1、STAT6 和 STAT3。I 在我们的患者队列（n = 32）中，CircATP8A1 的表达与 STAT6 呈正相关。