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- 2026年01月06日
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上海研匠生物科技有限公司
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外泌体体WB鉴定
一、技术简介
外泌体鉴定的国际标准《细胞外囊泡杂志MISEV2018》对外泌体的表征规定了最小试验要求：Western blot是通过抗原抗体特异性结合的原理，对外泌体标志蛋白进行检测，从蛋白质层面对外泌体进行鉴定。至少3个阳性（至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白）、1个阴性蛋白质标志物。外泌体阳性蛋白标志物可选择跨膜蛋白CD9、CD63、CD81，以及溶质蛋白TSG101、Alix、HSP70。外泌体阴性蛋白标志物可选择内质网蛋白Calnexin、细胞核蛋白histone 3或高尔基体蛋白GM130。
样本要求：血浆样本BCA量60ug，＞0.5μg/μl；细胞上清BCA量40μg，＞0.5μg/μl；冰袋运输。
本司有CD9、CD81、CD63和HSP70等抗体，专门用于WB检测，客户不用单独买抗体或代购抗体,。
二、实验流程
1. 外泌体BCA法蛋白定量。
2. SDS-PAGE凝胶电泳。
3. 转膜。
4. 封闭和抗体孵育。
5. ECL发光检测。
6. 提供实验报告。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：外泌体或由我司分离外泌体。
2. 公司提供：基本实验步骤、图片、数据分析结果。
3. 实验周期：5个工作日。
附图：外泌体常规检测
更多实验可点击下方链接：
外泌体提取实验：https://www.biomart.cn/infosupply/110578269.htm
外泌体鉴定实验：https://www.biomart.cn/infosupply/110564279.htm
外泌体检测NTA实验：https://www.biomart.cn/infosupply/95676015.htm
外泌体检测电镜实验：https://www.biomart.cn/infosupply/95676019.htm
外泌体蛋白质组学实验：https://www.biomart.cn/infosupply/110568960.htm
外泌体转录组，microRNA和lncRNA组学实验：https://www.biomart.cn/infosupply/110568892.htm
外泌体WB鉴定 https://www.biomart.cn/infosupply/95676009.htm
外泌体红色荧光（PKH26）标记试剂盒：https://www.biomart.cn/infosupply/110585349.htm
无外泌体胎牛血清：https://www.biomart.cn/infosupply/110567221.htm
无外泌体完全培养基：https://www.biomart.cn/infosupply/110585351.htm
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文献和实验1.Down-regulation of exosoma microPNA-224-3p derived from bone marrow-derived mesenchyma stem cels potentiates anciogenesis intraumatic osteonecrosis of the emoral head. FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology 2019.
2.Fang S ,He T , Jiand , et al. MiF-150-5p-modifed Bone Marrow Mesenchymal Stem Cels Derived Exosomes Ameliorate 0steonecrosis oiFemoral Head by Promoting Endothelial Cell Angiogenesis. 2020.
3.Meng Q , Ciu B . Exosomal MicroNA-320a Derved From Mesenchymal Stem Cels Regulates Rheumatoid Arthritis Fibroblast-Llike SynoviocyteActivation by Suppressing CXCL9 Expression[J]. Frontiers in Physiology, 2020, 11.
4.Zhu, Q; Ling, X; Yang, Y; et al.Embryonic Stem Cells-Derived Exosomes Endowed with Targeting Properties as Chemotherapeutics Delivery Vehicles for Glioblastoma Therapy.[J].Adv Sci (Weinh).2019,6(6):180189
注：如同时要求外泌体抽提、鉴定及蛋白质组学，请将样本要求量进行加和。 备注：请明确提供的样本体积。细胞上清及尿液，超过 50ml，每 50mL 算作一个 1 个样本，以此计算样本数，核算抽提周期。血清、血浆、关节液、脑脊液进行超速离心，每 5mL 算作 1 个样本，以此计算样本数，核算抽提周期。
TEM 透射电镜是外泌体鉴定的金标准，对于所有做外泌体的朋友们来说，是必经之路，基于很多老师们的呼声，我们的研究人员，经过细致化整理，把所有的操作过程都整理出来，供各位参考，经验有限，有不当之处，还请多多沟通。 一、首先，我们看看电镜的原理是啥？ 然后，电镜的结构也是比较复杂的！ 二、那么，我们看看样品有哪些要求？样品要求：1、能被电子束穿透（薄）2、耐电子束轰击3、有磁性的样品不可以放置4、长纤维样品若需上样需加盖铜网 三、接下来，我们看看规范化拍摄 Umibio 是怎么操作
分析（NTA）和 WB marker 鉴定。 二、TEM 鉴定外泌体形态： 将提取的外泌体样本置于冰盒中，使用移液枪吸取外泌体样本于铜网上静置 1 min。(用镊子夹铜网要轻，防止铜网夹破)。再将铜网上的外泌体样本吸干，使用移液枪吸取醋酸双氧铀染色液室温染色。随后将染色完成的样本放于灯下烤。样本制好后，观察拍照，保存图片。结果如下： 图一 TEM 鉴定外泌体的形态 从 TEM 结果中可以看出，从肿瘤组织中分离得到的外泌体具有典型的杯托状结构，且数量比较多。 三
