RIPA裂解液(强，含抑制剂)

RIPA裂解液配方

1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g （1%）0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml （1%）Aprotinin

细胞凋亡 WB 没成功，你是不是用了 RIPA？

细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程，通常表现为核浓缩，起皱，膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一，但是 WB 也不是谁都能做成功的，因为有可能你的第一步就做错了！用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步，样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备，看你是不是这样做的：自配裂解液或者购买 RIPA，加上样品研磨啊研磨，孵育啊孵育，然后离心扔掉沉淀（RIPA 不可溶组分），取上清（RIPA 可溶组分）进行下游实验。对对对！都是这么做啊，扔

多篇 SCI 发现用 RIPA 提蛋白存在问题，我们该如何应对？

量范围，不同样品的不可溶组分也有细节上的差异。不同样品的蛋白质丢失是不可预测的。然而，商业试剂盒提取蛋白不产生不可溶组分，更快速，可获得更高产量更完整的蛋白质图谱（下图）。Ngoka [8] 用质谱平行对比了几组乳腺癌 RIPA 可溶组分和不可溶组分的蛋白质图谱。结果发现，使用含尿素的裂解液提取 RIPA 不溶性组分中的平均分子量蛋白质含量比可溶性组分高 60% 。换句话说，许多大分子量蛋白质被丢失在 RIPA 不可溶组分中。研究还表明，几乎所有的细胞外基质（ECM）和许多细胞