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- Millipore
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- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
Merck
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大量
- 英文名：
Immobilon Western HRP Substrate
- 保存条件：
2 to 8 °C
- 规格：
50 mL
Immobilon Western HRP Substrate provides high sensitivity for Chemiluminescent detection in western or dot/slot/spot blotting applications on both PVDF and nitrocellulose membranes, and is compatible with all commonly used buffers and blocking reagents.
Product Family Information
Luminata™ Western HRP SubstratesPremixed for convenience.Formulated for optimal results. The new family of Luminata HRP chemiluminescent substrates is premixed for convenience. Just pour directly onto the Western membrane without worrying about pipetting error. Luminata substrates cover a range of sensitivities for all your needs. |
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文献和实验【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法
暗室实验 暗室实验的操作流程： 1. 新鲜配制1-2ml工作液（A液与B液1:1或1:40混合配制） 2. 进入暗室，在黑暗的条件下，加入1μl未稀释的二抗（HRP连接物） 3. 混合后，可立即在暗室中观察到蓝色光 暗室实验的注意事项： ? 工作液按正确比例混合，且新鲜配制 ? 在暗室中加入二抗 ? 直接使用未稀释的二抗 ? 加入二抗后，立即观察 注：暗室实验可同时检测底物是否有活性，以及二抗是否有活性。 如果暗室实验结果阴性： 更换其它二抗，再次进行
方法也不同，常用的检测系统有化学发光检测（ECL）和化学显色 DAB 检测系统。 化学发光检测（ECL）： 利用 HRP 催化化学发光物质，生成一种不稳定的中间物质，其衰变时在暗室内形成明显的肉眼可见的化学发光带，利用 X 胶片感光 原理，将结果记录下来。 ECL 显色试剂配制：化学发光底物 A 和 B 按照 1：1 比例等体积混匀。 将混合好的显色底物覆盖印迹膜 1-5 min，黑暗条件下观察荧光效果。 在暗室可用放射自显影胶片或化学发光成像系统记录结果 。 如采用放射自显影胶片，曝光几秒
实验的最后一步，也是实验成败关键的一步。显色标记方法包括生物素标记、地高辛标记、各种酶标记等，酶标的底物有丰富的选择，显色方法也多种多样。其中主流的显色方法为酶促反应，该方法相较生物素反应更快也更安全。 酶促反应根据不同底物显色方法又分为化学发光和底物显色。化学发光法灵敏度高，可达pg级；底物显色操作简单且成本低。目前最为人熟知的底物显色有HRP（辣根过氧化物酶，Horseradish Peroxidase）和AP（碱性磷酸酶，Alkaline Phosphatase）两种。
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