定量蛋白组学实验

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应用领域	医疗卫生,生物产业,综合

定量蛋白组学：技术是依据细胞生长对必需氨基酸的依赖原理，利用稳定同位素标记（ 13C，15N，2H）的必需氨基酸对细胞蛋白质组进行代谢标记的方法；13C,15N,2H是稳定同位素，没有放射性，因此可以在常规条件下进行试验。

Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。将(13C，15N，2H)等稳定同位素标记的R、K、L加入细胞培养基中，在细胞进行蛋白质合成时，这些稳定同位素标记的氨基酸自然被“掺入”到蛋白质中。通过>6代的细胞增殖，整个细胞的蛋白质组会被稳定同位素氨基酸”标记”；

  SILAC“标记”了蛋白质与“未标记”的蛋白质（普通培养基培养）存在数目的质量差异，该质量差异在后续LC-MS的质谱( MSl)中呈现一对同位素质谱峰，通过质谱峰的信号强度能实现对2组样品中每一个蛋白质表达水平的定量，终能确定蛋白质表达水平差异（差异蛋白质组学分析）和区分特异性和非特异性相互作用（蛋白质相互作用分析）；同时通过质谱( MS/MS，MS2)实现对样品中蛋白质的鉴定。

  SILAC技术结合LC-MS能同时实现对2组样品中蛋白质的定性和定量分析。通过定墨信息能直接反映出样品之间的蛋白质表达水平差异，便于快速找到感兴趣的目标分子。同时，利用SILAC技术，能明显提高文章的档次。

SILAC氨基酸对照表：

SILAC实验设计：