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定量蛋白组学实验
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上海达为科生物科技有限公司
定量蛋白组学
Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。将(13C,15N,2H)等稳定同位素标记的R、K、L加入细胞培养基中,在细胞进行蛋白质合成时,这些稳定同位素标记的氨基酸自然被“掺入”到蛋白质中。通过>6代的细胞增殖,整个细胞的蛋白质组会被稳定同位素氨基酸”标记”;
SILAC“标记”了蛋白质与“未标记”的蛋白质(普通培养基培养)存在数目的质量差异,该质量差异在后续LC-MS的质谱( MSl)中呈现一对同位素质谱峰,通过质谱峰的信号强度能实现对2组样品中每一个蛋白质表达水平的定量,终能确定蛋白质表达水平差异(差异蛋白质组学分析)和区分特异性和非特异性相互作用(蛋白质相互作用分析);同时通过质谱( MS/MS,MS2)实现对样品中蛋白质的鉴定。
SILAC技术结合LC-MS能同时实现对2组样品中蛋白质的定性和定量分析。通过定墨信息能直接反映出样品之间的蛋白质表达水平差异,便于快速找到感兴趣的目标分子。同时,利用SILAC技术,能明显提高文章的档次。
SILAC氨基酸对照表:
SILAC实验设计:
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