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- 山海
- 2025年12月24日
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上海达为科生物科技有限公司
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甲苯胺蓝染色
一、染色原理与特性
甲苯胺蓝（Toluidine Blue）是一种人工合成的醌亚胺类碱性染料，具有两个发色团（胺基和醌型苯环）和两个助色团，能与组织中的酸性物质（如核酸、酸性黏多糖、硫酸软骨素等）结合。其特性包括：
- 异染性：在特定条件下，染色结果与染料本身颜色不同（如肥大细胞颗粒呈紫红色，背景为蓝色）。
- 多靶点结合：
- 细胞核（DNA/RNA）呈蓝色；
- 肥大细胞颗粒（肝素/组胺）、软骨基质（硫酸软骨素）呈紫红色；
- 植物木质部呈蓝绿色，纤维素细胞壁呈蓝紫色。
- pH敏感性：染色特异性和强度受染液pH影响，强碱性环境（硼酸盐缓冲液）利于着色。
二、标准化实验流程
（一）通用操作步骤（以石蜡切片为例）
| 步骤 | 操作要点 | 关键技术参数 |
|---|---|---|
| 1. 样本制备 | 组织经4%多ju甲醛或10%福尔马林固定，石蜡包埋切片（4-6 μm） | 未脱钙硬组织需特殊处理，冷冻切片无需脱蜡 |
| 2. 脱蜡至水 | 二甲苯脱蜡2次（各10分钟）→梯度乙醇（100%→75%）复水→蒸馏水冲洗 | 脱蜡不彻底会导致染色不均，需显微镜验证 |
| 3. 染色 | 0.1%-1%甲苯胺蓝染液浸染10-30分钟（室温） | 软骨染色需延长至30分钟，肥大细胞染色可缩短至20分钟 |
| 4. 分化 | 1%盐酸酒精或bing酮分化1-5分钟，显微镜动态控制至背景透明、目标结构清晰 | 过度分化导致目标信号丢失，分化不足则背景过深 |
| 5. 脱水封片 | 梯度乙醇脱水→二甲苯透明→中性树胶封固 | 脱水不彻底会导致封片浑浊，树胶需覆盖组织外1-2 mm |
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文献和实验相关实验
HE&尼式染色.pdf
常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色 甲苯胺蓝染色 染色 观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布 Trap染色 染色 用于检测骨、骨细胞中破骨细胞的染色，使破骨细胞呈红色，细胞核浅蓝色，用以显示破骨细胞的分布及数量变化。 ALP染色 染色 用于检测骨细胞、骨组织、肾、肝碱性磷酸酶的染色方法，使碱性磷酸酶呈黑色，细胞核呈浅蓝色，这是成熟成骨细胞的标志性酶；也可用于肝炎和肾炎的检测
一、样本准备 详见流式细胞术样本制备技术、流式实验样本制备方法及注意事项 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300 g 离心 5 min，弃上清 向细胞中加入适量细胞染色 buffer（或含 1%BSA 的 PBS），用移液枪轻轻吹打细胞重悬 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL 三、设置实验分组 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗能和 Fc
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