转基因元件pUbi PCR试剂盒规格

转基因元件pUbi PCR试剂盒规格实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。

储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
    ZNF693    锌指蛋白693抗体
    ZBTB3    锌指蛋白ZBTB3抗体
    ZWILCH    着丝粒ZWILCH蛋白抗体
    ZFP57    锌指蛋白57抗体
    ZNF717    锌指蛋白717抗体
    ZDHHC7    锌指蛋白370抗体
    ZNF3    锌指蛋白3抗体
    ZNF423    锌指蛋白423抗体
    ZNF239    锌指蛋白239抗体
    ZNF426    锌指蛋白426抗体
    phospho-ZNF598(Tyr306)    磷酸化锌指蛋白598抗体
    ZNF423    锌指蛋白423抗体
    zinc finger protein 830    锌指蛋白830抗体
    ZAR1L    受精卵抑制蛋白1样蛋白抗体
    ZNF434    宫颈癌抑癌蛋白5/锌指蛋白434抗体
    ZBTB42    锌指蛋白925抗体
    SLC25A20    线粒体二羧酸载体蛋白20抗体
转基因元件pUbi PCR试剂盒规格实验步骤    SLC27A1    长链脂肪酸转运蛋白1抗体
    Sin3b    转录抑制蛋白Sin3b抗体
    Sphingomyelin Synthase 1    鞘磷脂合成酶1抗体
    14-3-3 alpha + beta    14-3-3 α + β蛋白抗体
    phospho-14-3-3 beta + zeta (Ser186)    磷酸化14-3-3 β/ζ抗体
    phospho-14-3-3 Tau (Ser232)    磷酸化14-3-3 τ抗体
    15 Lipoxygenase 2    花生四烯酸15脂氧合酶2抗体
    2 Cys Peroxiredoxin    硫氧还蛋白还原酶抗体
    5HT2C Receptor    5-羟色胺受体2C抗体
    5HT5B Receptor    5-羟色胺受体5B抗体
    SRRM4    丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白4抗体
    SRRM3    丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白3抗体
    phospho-CK II beta (Ser209)    磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶II β(casein kinase IIβ)抗体
    MOP5    单核细胞蛋白5抗体
    SAMD9    SAMD9蛋白抗体
    SARM1    SARM1蛋白抗体
    p150 CAF1    染色质组装因子1P155抗体
    Sauvagine    蛙皮降压肽抗体
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。