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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
31
- 英文名：
2×SYBR Green qPCR Mix(including ROX)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
50 次 200 次
ELISA测定错误的原因分析：ELISA测定出现假阳性和假阴性的结果，主要有标本因素、试剂因素和操作因素，其中标本因素主要由干扰性物质所致，分内源性和外源性两种。仅供科研使用
产品名称: 2×SYBR Green qPCR Mix试剂盒（含ROX）
英文名称 2×SYBR Green qPCR Mix(including ROX)
规格: 50 次 200 次
分类 PCR荧光核酸试剂
选择方法：
1. 明确检测何种蛋白；
2. 明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性zui好；
3. 寻找检测这些物种蛋白的试剂盒；
4. 咨询我公司使用的抗体类型；
5. 做出自己的判断该买哪个试剂盒。
动物组织匀浆的制备：
1、取组织块（0.1g～0.2g）zui少可到2～5mg在冰冷的盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（pH7.4， 0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的溶液）或者0.86%的盐水于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式有多种：手工匀浆，机器匀浆，超声粉碎。
① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成10%的匀浆液。
② 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
③ 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机2500转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定。
对于测定结果的判定主要分定性和定量两种：
①定性测定：定性测定的结果判断一般分为"阳性"和"阴性"两种。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应，"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
②定量测定：在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
A.测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
B.测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。
ELISA的操作要点:
1）标本的采取和保存：可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本；
2）试剂的准备：所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液；
3）加样：一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。
4）保温：ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育。
5）洗涤：洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
6）显色和比色：显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
7）结果判断：分定性判定和定量判定。
2×SYBR Green qPCR Mix试剂盒（含ROX）要点：
☆标本的采取和保存：可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本；
试剂的准备：所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液；
加样：一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。
保温：ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育。
洗涤：洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
显色和比色：显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
结果判断：分定性判定和定量判定。
Trazodone 中文名：盐酸曲唑酮 分子式：C19H23Cl2N5O Guanidine 500g
trans-4-Aminocyclohexanol 中文名： 分子式：C6H13NO 月桂酰基麦芽糖苷 1g
Tranexamic acid 中文名：凝血酸 分子式：C8H15NO2 N-Dodecyl-β-Maltoside
Torososide A 中文名： 分子式：C38H32O15 新霉素 5g
Topiramate 中文名：托吡酯 分子式：C12H21NO8S NeomycinSulfate 25g
小鼠神经营养素4 英文名称： Neuroophin-4 规格： 48T/96T 英文缩写： -4 Imatinib mesylate 中文名：伊马替尼 分子式：C30H35N7O4S 度：98.0%
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Imatinib 中文名：伊马替尼 分子式：C29H31N7O 度：98.0%
小鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Imatinib 中文名：伊马替尼 分子式：C29H31N7O
小鼠神经肽Y(mouse NPY) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Diclazuril 101831-37-2 中文名：地克珠利 分子式：C17H9Cl3N4O2 度：99.0%
小鼠神经酸酶 英文名称： Mouse Neidase 规格： 48T/96T 英文缩写： NEU Imatinib mesylate 中文名：伊马替尼 分子式：C30H35N7O4S
豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 2-Acetylbutyrolactone 中文名：2-乙酰基丁内酯 分子式：C6H8O3 度：98.0%
豚鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-10 ELISA Kit 2-Acetyl-6-methoxynaphthalene 3900-45-6 中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘 分子式：C13H12O2 度：99.0% 关键词：
豚鼠白介素10(IL10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit 2-Acetyl-1H-Isoindole-1,3(2H)-Dione 中文名：2-乙酰基-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮 分子式：C10H7NO3 度：93.0%
豚鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-1 ELISA Kit 2-Acetonaphthone
1993/8/3
中文名：2'-萘乙酮 分子式：C12H10O 度：98.0% 关键词：
豚鼠白蛋白(ALB)ELISA试剂盒 ，英文名： ALB ELISA Kit 2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose 中文名：N-乙酰氨基葡萄糖 分子式：C8H15NO6 度：99.0%
2×SYBR Green qPCR Mix试剂盒（含ROX）β-Sitosterol 中文名：β-谷甾醇 分子式：C29H50O 应急反应生长因子-1 英文名称： Early growth response 1 规格： 48T/96T 英文缩写： EGR-1
β-Anhydrouzarigenin 中文名： 分子式：C23H32O3 转录因子E2F1 英文名称： anscription factor E2F1 规格： 48T/96T 英文缩写： E2F1
α-Tocopherolquinone 中文名： 分子式：C29H50O3 腺来源的内皮生长因子 英文名称： endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor 规格： 48T/96T 英文缩写： EG-VEGF
α-Spinasterone 中文名： 分子式：C29H46O 中性粒细胞蛋白酶抑制剂Elafin 英文名称： neuophil elastase inhibitor Elafin 规格： 48T/96T 英文缩写： Elafin
α-Spinasterol glucoside 中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷 分子式：C35H58O6 游离脂肪酸（NEFA）检测 Total iron binding (TIBC) detection
产品名称: 2×SYBR Green qPCR Mix试剂盒（含ROX）
英文名称 2×SYBR Green qPCR Mix(including ROX)
规格: 50 次 200 次
分类 PCR荧光核酸试剂
选择方法：
1. 明确检测何种蛋白；
2. 明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性zui好；
3. 寻找检测这些物种蛋白的试剂盒；
4. 咨询我公司使用的抗体类型；
5. 做出自己的判断该买哪个试剂盒。
动物组织匀浆的制备：
1、取组织块（0.1g～0.2g）zui少可到2～5mg在冰冷的盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（pH7.4， 0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的溶液）或者0.86%的盐水于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式有多种：手工匀浆，机器匀浆，超声粉碎。
① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成10%的匀浆液。
② 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
③ 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机2500转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定。
对于测定结果的判定主要分定性和定量两种：
①定性测定：定性测定的结果判断一般分为"阳性"和"阴性"两种。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应，"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在间接法和夹心法ELISA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。
②定量测定：在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
A.测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
B.测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。
ELISA的操作要点:
1）标本的采取和保存：可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本；
2）试剂的准备：所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液；
3）加样：一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。
4）保温：ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育。
5）洗涤：洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
6）显色和比色：显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
7）结果判断：分定性判定和定量判定。
2×SYBR Green qPCR Mix试剂盒（含ROX）要点：
☆标本的采取和保存：可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本；
试剂的准备：所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液；
加样：一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。
保温：ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育。
洗涤：洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
显色和比色：显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
结果判断：分定性判定和定量判定。
Trazodone 中文名：盐酸曲唑酮 分子式：C19H23Cl2N5O Guanidine 500g
trans-4-Aminocyclohexanol 中文名： 分子式：C6H13NO 月桂酰基麦芽糖苷 1g
Tranexamic acid 中文名：凝血酸 分子式：C8H15NO2 N-Dodecyl-β-Maltoside
Torososide A 中文名： 分子式：C38H32O15 新霉素 5g
Topiramate 中文名：托吡酯 分子式：C12H21NO8S NeomycinSulfate 25g
小鼠神经营养素4 英文名称： Neuroophin-4 规格： 48T/96T 英文缩写： -4 Imatinib mesylate 中文名：伊马替尼 分子式：C30H35N7O4S 度：98.0%
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Imatinib 中文名：伊马替尼 分子式：C29H31N7O 度：98.0%
小鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Imatinib 中文名：伊马替尼 分子式：C29H31N7O
小鼠神经肽Y(mouse NPY) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Diclazuril 101831-37-2 中文名：地克珠利 分子式：C17H9Cl3N4O2 度：99.0%
小鼠神经酸酶 英文名称： Mouse Neidase 规格： 48T/96T 英文缩写： NEU Imatinib mesylate 中文名：伊马替尼 分子式：C30H35N7O4S
豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 2-Acetylbutyrolactone 中文名：2-乙酰基丁内酯 分子式：C6H8O3 度：98.0%
豚鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-10 ELISA Kit 2-Acetyl-6-methoxynaphthalene 3900-45-6 中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘 分子式：C13H12O2 度：99.0% 关键词：
豚鼠白介素10(IL10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit 2-Acetyl-1H-Isoindole-1,3(2H)-Dione 中文名：2-乙酰基-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮 分子式：C10H7NO3 度：93.0%
豚鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-1 ELISA Kit 2-Acetonaphthone
豚鼠白蛋白(ALB)ELISA试剂盒 ，英文名： ALB ELISA Kit 2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose 中文名：N-乙酰氨基葡萄糖 分子式：C8H15NO6 度：99.0%
2×SYBR Green qPCR Mix试剂盒（含ROX）β-Sitosterol 中文名：β-谷甾醇 分子式：C29H50O 应急反应生长因子-1 英文名称： Early growth response 1 规格： 48T/96T 英文缩写： EGR-1
β-Anhydrouzarigenin 中文名： 分子式：C23H32O3 转录因子E2F1 英文名称： anscription factor E2F1 规格： 48T/96T 英文缩写： E2F1
α-Tocopherolquinone 中文名： 分子式：C29H50O3 腺来源的内皮生长因子 英文名称： endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor 规格： 48T/96T 英文缩写： EG-VEGF
α-Spinasterone 中文名： 分子式：C29H46O 中性粒细胞蛋白酶抑制剂Elafin 英文名称： neuophil elastase inhibitor Elafin 规格： 48T/96T 英文缩写： Elafin
α-Spinasterol glucoside 中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷 分子式：C35H58O6 游离脂肪酸（NEFA）检测 Total iron binding (TIBC) detection
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文献和实验相关实验
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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