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- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海攸碧艾
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
500rxn(20μl/rxn)
产品简介:
2x SYBR Green qPCR Mix 是 SYBR Green I 嵌合染料法专用的 qPCR 试剂,为 2x 预混液,包含除引物和 DNA 样品 以外的所有 qPCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是全新的 Hotmaster Taq DNA聚合酶,配合精心优化的 Buffer 体系,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定 可靠的 qPCR 结果,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
本产品含有独立包装参比染料 100x ROX(50μmol/μl),用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,不同仪器所需 ROX Reference Dye 浓度不同。
保存条件:
-20℃保存,有效期 24 个月, 使用前充分融解,轻柔颠倒混匀。短期使用可放在 4 ℃,避免反复冻融。
快捷用法:
1. 需要高浓度 ROX 的机型(终浓度为 0.5 μmol/μl):每 1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix 加入 25ul 100x ROX, 充分混匀后,可以直接使用。
2. 需要低浓度 ROX 的机型(终浓度为 0.05 μmol/μl):每 1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix 加入 2.5ul 100x ROX, 充分混匀后,可以直接使用。
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文献和实验PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法,最好在PCR扩增程序结束
几个复孔,选择重复性好的 CT 值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查:①加样准确度;②移液器吸取液体的准确度;③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样,减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系,并且增加模板的稀释梯度,大体积加样。如:原液 cDNA 添加 1μl,可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍,添加 5μl,使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x












