sigma特约代理商|H0262-10VL HAT 培养基添

【共享】单克隆抗体的制备

, Sigma ，H0137-10VL； HT , Sigma， H0262-10VL； Laminarin ，Sigma ，L9634； CRT/39-272 ,自己纯化所得； PEG ，罗氏 ，RD10783641001； 降植烷 ，Sigma ，P2820； DMSO ，Sigma ，D2650:； DMEM ，HyClone ，SH30021.01B； FBS ，HyClone ，SH30084.03； SP2/0 ，本实验室细胞库。

单克隆抗体制备

杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。 表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系 骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，应定期用8-氮鸟嘌呤进行处理，使生存的细胞对HAT呈均一的敏感

杂交瘤细胞的制备

的平皿中。以弯头针头压住脾脏，用小针头在脾脏上插孔，并用镊子挤压，使脾细胞充分释放，制成脾细胞悬液。3. 饲养细胞的制备取一只健康的ICR小鼠，摘眼球采血，颈脱臼处死，体表消毒和固定后，从大腿上剪开皮肤，暴露腹膜，酒精棉球消毒腹膜。用10mL注射器，12#针头，注射5-10mL HAT培养基到腹腔，右手固定注射器，左手持酒精棉球轻轻按摩腹部，抽回腹腔内液体，注入已准备好的容器中。4. 细胞融合a、将上述制备的骨髓瘤细胞与脾细胞混合于一支50mL的带盖的离心管中，1000rpm离心10min，上清