- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 细胞类型:
贴壁生长
- 物种来源:
详见说明书
- 免疫类型:
详见说明书
- 细胞形态:
成纤维细胞
- 运输方式:
电询
- 年限:
详见说明书
- 生长状态:
详见说明书
- 规格:
1*10^6
2) 细胞鉴定:卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式:不规则细胞,贴壁培养。
细胞传代步骤:
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞复苏步骤: 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
注意事项:
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
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文献和实验veritassea 各位大侠大家好,我想用腺病毒载体基因体内转染小鼠的DC细胞和T细胞,但是有人说这些免疫细胞体内转染的效率非常低,具体是多少也不知道。请问究竟转染效率低于多少就不能应用于实验呢?如果这样不可行的话,还有其他的办法吗?谢谢各位指导! david_xmu 滴度整高点,大于10的12次方VP。 veritassea 好的,谢谢!我会试试看。 万胖宝宝
成像质谱流式揭示新冠逝者体内多器官存在免疫细胞及细胞因子反馈失调
中的整体变化,筛选出新冠感染前后变化普适且剧烈的生物标志物,为今后的新冠治疗方案提供理论基础及指导方向。 文章中的主要结论如下: 单核细胞,巨噬细胞,DC细胞,NKT细胞和B细胞在肺和小肠中存在明显增多,这说明肺和小肠是新冠病毒攻击的主要器官。 在肺中,IL-10主要由CD11b+巨噬细胞分泌,而不是由CD11c+DC细胞分泌,在小肠中,IL-10在巨噬细胞及DC细胞中均有很高的表达。HLA-DR在肺和小肠的巨噬细胞和DC细胞中均出现表达下调。 TNF-α
) 第6天在培养后的培养基中加入适量化合物B原液(混合后化合物B的终浓度为1x)以完成单核DC细胞的成熟过程。不要更换培养基,在37℃和5%的 CO2的培养箱中再培养24-48小时。 6、收获成熟的单核 DC 细胞(第 7/8 天) 反复上下吹洗几次以吹打松散附着的细胞。将含有细胞的培养基转移到 50ml 的离心管中。用180g 的离心条件下将收货的单核 DC 细胞离心10分钟,弃去上清液。 注意:成熟的单核 DC 细胞都是非贴壁细胞,由于他们有多个螺旋状树突,而表现
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