人DC细胞

细胞名称:    人DC细胞

种属来源:    人

组织来源:    外周血

疾病特征:    正常原代细胞

细胞形态:    上皮细胞样

生长特性:    半悬浮生长

培养基:    人DC细胞推荐使用EliteCell原代DC细胞培养体系
作为体外培养原代DC细胞的培养基。

生长条件:    气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, 

传代方法:    1：2至1：6，每周2次。

冻存条件:    90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存

细胞鉴定:    CD11c免疫荧光染色为阳性，经鉴定细胞纯度高于90%。

QC检测:        不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

特点和简介
树突状细胞（Dendritic cells, DC）是机体功能强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。 
DC的来源有两条途径：①髓样干细胞在GM-CSF的刺激下分化为DC，称为髓样DC，也称DCl，与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞；包括朗格汉斯细胞，间皮（或真皮）DCs以及单核细胞衍生的DCs等，②来源于淋巴样干细胞，称为淋巴样DC或浆细胞样DC，即DC2，与T细胞和NK细胞有共同的前体细胞。树突状细胞(DC)表面具有丰富的抗原递呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能强大的专职抗原递呈细胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力，是目前发现的惟一能激活未致敏的初始型T细胞的APC。

接受后处理
1) 收到人DC细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培养注意事项
1.  收到细胞后首先观察细胞瓶是否完，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。

2.  仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，人DC细胞责任由客户自行承担。

3.  用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4.  静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6.  建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。