油菜内标准cruciferin基因LAMP试剂盒

油菜内标准cruciferin基因LAMP试剂盒储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制卷曲螺旋结构域蛋白94抗体
卷曲螺旋结构域蛋白82抗体
CDK5激活结合蛋白2抗体
CDK2相互作用蛋白抗体
周期蛋白依赖性激酶14抗体
CUE结构域蛋白1抗体
卷曲螺旋结构域蛋白52抗体
补体片段C3c抗体
卷曲螺旋结构域蛋白68抗体(皮肤T淋巴细胞淋巴瘤相关抗原)
卷曲螺旋结构域蛋白83抗体
卷曲螺旋结构域蛋白21抗体
卷曲螺旋结构域蛋白6抗体(乳头状甲状腺癌编码蛋白)
细胞周期素依赖激酶2相关蛋白2抗体
1号染色体开放阅读框201抗体
卷曲螺旋结构域蛋白7抗体
卷曲螺旋结构域蛋白80抗体
CD163蛋白样1抗体
周期素依赖性激酶5调节蛋白1样蛋白1抗体
癌胚抗原相关细胞粘附分子19抗体
先天性红细胞生成异常性贫血蛋白1抗体
癌胚抗原相关细胞粘附分子16抗体
癌胚抗原相关细胞粘附分子21抗体
猫眼综合征染色体候选基因5抗体
卷曲螺旋结构域蛋白135抗体
跨膜结构域边缘蛋白CEE抗体
分子伴侣CESK1蛋白抗体
卷曲螺旋结构域蛋白124抗体
油菜内标准cruciferin基因LAMP试剂盒CDK5激活结合蛋白1抗体
22号染色体开放阅读框31抗体
细胞分裂周期37样蛋白1抗体
丙型肝炎NS2反式调节蛋白/衰老相关的基因10蛋白抗体
醛固酮合成酶CYP11B2抗体
激酶β抗体
卷曲螺旋结构域蛋白5抗体
有丝分裂着丝粒蛋白F抗体
细胞周期通道和神经细胞分化蛋白1抗体
凝集蛋白家族10抗体（肝）
Cordon bleu蛋白样1抗体
凝集蛋白家族11抗体
铜代谢结构域蛋白1抗体
铜代谢结构域蛋白7抗体
COMM结构域蛋白4抗体
20号染色体开放阅读框96抗体
CTDSPL蛋白抗体
CTDSPL2蛋白抗体
乙酰胆碱酯酶相关蛋白抗体
细胞粘附分子2
耳聋-甲状腺肿综合征相关COBL蛋白抗体
3号染色体开放阅读框26抗体
二氢嘧啶酶相关蛋白5抗体
磷酸化二氢嘧啶酶样2抗体
脑衰蛋白反应调节蛋白4抗体
卷曲螺旋结构域蛋白87抗体
卷曲螺旋结构域蛋白92抗体
卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD8抗体
大脑亮氨酸拉链结构域蛋白抗体
卷曲螺旋结构域蛋白93抗体
卷曲螺旋结构域蛋白96抗体
卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD5抗体
卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD6抗体
9号染色体开放阅读框115抗体标准曲线。

具有如下优点：
　　(1)操作简单，LAMP核酸扩增是在等温条件下进行，对于中小医院只需要水浴锅即可，产物检测用肉眼观察或浊度仪检测沉淀浊度即可判断。对于RNA的扩增只需要在反应体系中加入逆转录酶可同步进行(RT．LAMP)，不需要特殊的试剂及仪器。
　　(2)快速高效，因为不需要预先的双链DNA热变性．避免了温度循环而造成的时间损失．核酸扩增在l h内均可完成，添加环状引物后时间可以节省1／2，多数情况在20。30 rain均可检测到扩增产物。且产物可以扩增至109倍，达0.5 mg／mL．应用专门的浊度仪可以达到实时定量检测。
　　(3)高特异性，由于是针对靶序列6个区域设计的4种特异性引物。6个区域中任何区域与引物不匹配均不能进行核酸扩增。故其特异性极高。
　　(4)高灵敏度，对于病毒扩增模板可达几个拷贝，比PCR高出数量级的差异。
缺点：由于LAMP扩增是链置换合成，靶序列长度在300 bp以内 gt;500 bp则较难扩增。故不能进行长链DNA的扩增。由于灵敏度高。极易受到污染而产生假阳性结果。故要特别注意严谨操作，以及在产物的回收鉴定、克隆、单链分离方面均逊色于传统的PCR方法。
　　二、LAMP（20μL 体系）
　　3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分：
　　4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
　　5. 置于 25℃5min（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 61℃扩增60min。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。
　　6. 80℃10min 灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。 　　7. 将反应管放置在白色背景前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
　　8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的 9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）。