气单胞菌通用PCR试剂盒

气单胞菌通用PCR试剂盒

Aeromonas spp

产品及特点

气单胞菌属（Aeromonas spp.）属于气单胞菌科，广泛分布于自然界， 可从水源、土壤以及人的粪便中分离，引起的疾病广泛存在于哺乳动物（如人、 鸟类等）和冷血动物（如鲑、鱼、蛇等）中。在人类主要引起肠内感染和肠外 感染，前者主要表现为胃肠炎，患者通常呈症状较轻的水样腹泻，症状严重， 呈血性粪便且便中有大量白细胞者（和志贺菌引起的痢疾很相似）较少见，本 菌是夏季腹泻的常见病原菌之一，主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素；后者 包括败血症、伤口、眼、关节、腹腔内及其他感染，主要与外伤后伤口接触了 污染的水有关。因此快速灵敏检测气单胞菌具有重要的意义，本试剂盒就是为 此目的根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增气单胞菌 DNA，跟其他微生物无交 叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。 

气单胞菌通用PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR Magic Mix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂三	气单胞菌属通用 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	气单胞菌属通用 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	天净沙核酸释放剂试用装	20 次（1mL、绿盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性 对照管	标准曲线 样品管（2-7 管）
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
气单胞菌属通用 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
样品制备阴性对照（超纯水）		18 μL
样品制备阳性对照（气单胞菌属 通用阳性对照的 100 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （40个循环）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	60 sec
	72℃	10 min

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 471bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。 

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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