人类嗜T淋巴细胞病毒1型前病毒PCR试剂盒
Human T-cell Lymphoma Virus Provirus(HTLV-1)
产品及特点
人类嗜 T 淋巴细胞病毒1型(Human T-lymphotropic Virus 1,HTLV-1)是一 种感染后可导致血癌或其他转移癌的 RNA 病毒,在体内主要感染 CD4+ T 淋巴细胞, 可引起成人 T 淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV-Ⅰ相关脊髓病(HTLV-Ⅰassociated myelopathy,HAM/热带痉挛性下肢瘫,tropical spastic paraparesis TSP)及色 素层炎(uveitis),主要通过输血、针头、性行为、母子传染。HTLV-I 病毒是爱滋病 毒 (HTLV-I) 的远亲,但 HTLV-I 和爱滋病的发生没有任何关连。目前各捐血中心以 酵素免疫法全面筛检 HTLV-I 病毒。
患者的白血病细胞内有 HTLV 前病毒 DNA 的整合,所以 HTLV-1前病毒 DNA 水 平可以作为病毒载量之外的另一标志物。本产品就是针对此需求而建立的一种检测 HTLV-1前病毒 DNA 的 PCR 检测方法,本试剂盒具有下列特点:
1. 根据 HTLV-1 PX 基因设计的针对 HTLV-1 前病毒的 PCR 引物,专一性强。
2. 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
3. 试剂盒有阳性对照,别于区分真假阳性。
4. 本试剂盒足够 50 次 40uL 反应体系的常规 PCR。
5. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
人类嗜T淋巴细胞病毒1型前病毒PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3. |
1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 |
1 mL(本色盖)) |
试剂三 |
HTLV-1 前病毒 PCR 引物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂四 |
HTLV-1 前病毒 PCR 阳性对照 |
50 μL(黄盖)) |
试剂五 |
天净沙 DNA 释放剂试用装 |
50 次(试用装) |
试剂六 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
N+2个 样品管 |
PCR阴性对照 |
PCR阳性对照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各20 μL |
20 μL |
20 μL |
HTLV-1 前病毒 PCR 引物混合液 |
各2 μL |
2 μL |
2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 |
各 18 μL |
|
|
超纯水 |
|
18 μL |
- |
HTLV-1 前病毒 PCR 阳性对照 10000 倍稀释液 |
- |
|
18 μL |
4. 按下列 PCR 参数进行 PCR 扩增:
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
94℃ |
4 分钟 |
PCR 反应 (30 个循环) |
94℃ |
60 秒 |
50℃ |
30 秒 |
72℃ |
60 秒 |
后续延伸 |
72℃ |
10 分钟 |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!