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- 对于良恶性肿瘤的鉴别具有一定的意义。
- 2025年12月03日
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- 文献和实验
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- 提供商：
上海研谨生物
- 服务名称：
核仁组成区嗜银-AGNOR染色实验代做
一.核仁组成区嗜银(AGNOR)染色简介
核仁组成区(NORs)是染色体上的一个编码核糖体RNA(rRNA)的片段，存在于DNA特异性环上，凸向核仁。在电镜下，核仁组成区为在电子致密区中的境界不清的浅染区域。在石蜡切片上,在核仁中见到的每一个点状反应颗粒有可能代表多 个AgNOR位点。核仁组成区嗜银蛋白染色主要特点是操作简便、批量染色的较为经济, AgNOR位点的数量增加与细胞增殖性增加有关，对于良恶性肿瘤的鉴别具有一定的意义。
二、试剂配制
1. AgNOR染色液
甲液:明胶2 g溶于双蒸水至99 ml,在60°C使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml摇匀待用。
乙液: AgNO350 g溶解于双蒸水中至100 ml, 4°C冰箱保存。
2. AgNOR工作液
取甲液10 ml,乙液20 ml临用前混合。
三、染色步骤
1.切片脱蜡至水
2.双蒸水洗2次
3.AgNOR工作液中(25°C) 浸染30分钟(暗处进行) (镜下观察)
4.脱水，透明，封固
5结果:油镜观察，细胞核及胞质背暴为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。
四、样本说明
1、 石蜡切片
取材: 1.组织离体后需及时固定; 2.组织标本不宜过大、过厚。
固定: 1.固定液: 10%福尔马林(4%Paraformaldehyde) 或10%中性甲醛: 2.用量: -般固定液的量与组织体积比为
10:1~20:1; 3. 固定:适宜的固定时间，主要根据材料的大小松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60°C烤片3-5小时后，可于常温或4°C干燥保存。
2.冰冻切片
取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、acetone. 95%酒精、 4%Paraformaldehyde等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干，密封后置于-80°C. -20°C保存， 尽快用于后续实验。
3.细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切
片。
4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次(根据研究目的，PBS洗涤可选择不做)。用4%Paraformaldehyde49C固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20°C保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后，于4°C冰箱中放置一段时间。
5.细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精(为常用)、酒精 Glacial acetic acid solution. Ethyl ether-酒精液和
Carney's液等。
五、注意事项
1.常用的固定液为中性甲醛和4%Paraformaldehyde, 能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。
2.病理实验切片好是防脱片，以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片，应告知切片有无防脱处理。
3.骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4.客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%Paraformaldehyde或10%中性甲醛固定， 如组织块极小请事先说明) . 蜡块
或切片(使用免疫组化专用切片，以避免实验过程中掉片)
5.待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6.若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验，需进行脱钙处理。
7.浸泡在固定液中的组织样本，在运输中容器需密封，防止破碎、渗漏。
实验代做服务：
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文献和实验结果：核仁组成区(AgNOR)显示大小不一的黑色颗粒;酸性粘多糖呈现;深浅不一的蓝绿色。 四、粘多糖和核仁组成区双染法(Double staining for cabohydrate and ANOR) (1)试剂配制： a)Schiff氏试剂见前。 b)胶性银液见前。 (2)操作方法： ①切片脱蜡至水; ②蒸馏水浸泡; ③0.5%高碘酸水溶液氧化切片10min; ④流水洗，蒸馏水浸洗1min
洗，蒸馏水洗数次。 (5)入Schiff氏液中室温下，暗环境30-90分钟。 (6)流水冲洗数分钟。 (7)常规脱水、封片。 结果：DNA呈紫红色。 注意事项： 1、1NHCL、Schiff液的配制方法见前。 2、该染色的优劣很关键。在于组织的固定。用甲醇85ml，福尔马林10ml，冰醋酸5ml配制的固定液效果很好。此外1NHCL液中酸化时间需严格控制。 3、5%亮绿淡复染，使胞浆及其它组织呈绿色。 二、核仁组成区蛋白显示法(PLOTON改良法) 核仁组成区
ml，冰醋酸5ml配制的固定液效果很好。此外1NHCL液中酸化时间需严格控制。 3、5%亮绿淡复染，使胞浆及其它组织呈绿色。 二、核仁组成区蛋白显示法(PLOTON改良法) 核仁组成区(Nucleolar Organier regions,NORS)是转录核糖体RNA(rRNA)的染色体片断并与嗜银酸性非组蛋白有关。核糖体RNA基因直接控制着核糖体和蛋白质的合成，因此，计数细胞内的AgNORS的数量可反映细胞增殖的情况。经典的方法是经Plotor改进的银染法。 操作方法： （1）切片脱蜡入水
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