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- 2025年07月16日
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纳微科技
纯化操作步骤
1、层析柱装填 匀浆液的浓度是指层析介质沉降至恒定体积时 的体积与匀浆的总体积的比值。为了得到最佳的 Protein A 亲和层析介质的装柱效果，我们推荐 0.5 M NaCl 浸泡层析介质，再用 0.5 M NaCl 溶液进行匀浆， 匀浆浓度为 50~70 %。具体装柱方法如下：
1）首先计算所装色谱柱的柱体积 Vc*, Vc = h * πr2 * Vc：色谱柱柱体积；h:色谱柱高度；r：色谱柱半径。
2）在原容器中轻轻搅动 Protein A 亲和层析介质， 使其完全分散在液体中形成匀浆液。量取所需原液的 质量或体积*； *一般情况下，Protein A 层析介质在压力作用下都会被压紧 导致体积收缩，为了获得紧密的柱床，推荐量取介质的体积过量 一些，一般为柱体积的 1.1 倍左右。
3）置换介质中 20%乙醇保存液，用 0.5 M NaCl 溶液 置换 20%乙醇，平衡过夜；
4）装柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液调整匀浆浓度为 50 ~ 70%；将匀浆一次性倒入层析柱。
5）压柱采用恒流加恒压模式,恒流为 60 cm/h, 30 min 以上；恒压采用 0.3 Mpa 左右，30 min，待胶面稳定 后，将柱头下降至胶面刻度线处 2-3 mm 处即可； 6）按照 SOP 进行柱效和对称性的测定，（As: 0.8-1.5， Plates: >2500）须达到预定标准。
Protein A亲和介质技术参数表
| 产品名称 |
UniMab |
NMab |
| 分离原理 |
Protein A亲和捕获 |
|
| 基质 |
聚甲基丙烯酸酯（PMMA） |
高交联琼脂糖 |
| 配基 |
耐碱型 rProtein A |
|
| 粒径（μm） |
50 μm |
90 μm |
| 每毫升介质结合载量(人IgG) |
> 40 mg/mL |
~55 mg/mL（5min驻留时间） |
| 纯化阶段 |
前期捕获、中度纯化 |
|
| 基本特点 |
制备型、高载量、高耐压、高分离效率、耐清洗 |
骨架亲水性好、非特异性吸附低、载量高、抗体批处理量大、耐碱性好 |
| 最大耐受压力 |
8 bar |
3 bar |
| 最高流速 (cm/h) |
800（20cm 柱高，200mm 直径） |
600（18cm 柱高，200mm 直径） |
| pH稳定性 |
3-12 |
|
| CIP在位清洗 |
0.1 - 0.5 M NaOH |
|
| 使用温度 |
4~40 ℃ |
|
| 存储 |
2% 苯甲醇 或20% 乙醇，2 - 8 ℃ |
|
| 典型应用 |
适合于大规模抗体和免疫球蛋白等纯化生产，比如单克隆抗体药物生产级制备 |
|
Protein A亲和预装柱技术参数表
| 产品名称 |
规格 （mm*mm） （直径*长度） |
最大耐压 （Mpa） |
建议保留时间 （min） |
动态吸附载量 （mg/mL Gel） |
| UniMab 预装柱 |
7*25 |
0.5 |
4-5 |
> 40 |
| NMab 预装柱 |
7*25 |
0.3 |
6 |
> 50 |
Protein A 亲和介质订货信息
| 产品名称 |
货号 |
包装规格 |
| UniMab® 50 |
17010-050100 |
提供 30mL、100mL、500mL、1L、5L、10L 、50L、100L标准包装 |
| UniMab® 50HC | 17010-250100 | |
| NMab™ |
17013-090100 |
|
| NMab™ Pro |
17013-070100 |
关于纳微
苏州纳微科技股份有限公司是一家专门从事高精度、高性能和高质量微球材料研发和生产的国家高新技术企业，是全球能提供多品种多规格微球产品的公司之一。
公司致力于建设全球先进的纳米微球精准制备和应用平台，产品涵盖硅胶正相、反相、HILIC、手性填料，聚合物反相、离子交换、疏水层析、亲和层析（Protein A、金属螯合、苯-硼-酸）、固相萃取、凝胶渗透色谱及特殊功能填料；提供色谱柱、磁珠、标准颗粒、分析检测、分离纯化实验技能培训及分离纯化整体解决方案。
• 电话｜400-828-1622
• 邮箱｜info@nanomicrotech.com
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文献和实验2、Comparison of Protein A affinity resins for twin-column continuous capture processes: Process performance and resin characteristics
亲和层析原理 亲和层析是一种通过生物分子之间的特异性相互作用来分离物质的层析方法，如酶和底物、抗原与抗体等非常专一的相互作用 （图9)。配基被固定在填料上，可以结合相应的生物分子，再采用合适的方法如降低pH值、离子强度等，或添加和配基或者目的分子类似的基团，使目标分子以活性的形式被洗脱。 图9 亲和层析原理 特点 速度快，操作简单，可以快速将目标蛋白与大量杂质进行分离 特异性高，经常一步即可达到大于90%的纯度 配基种类繁多，填料选择性高 （包括纯化标签抗体蛋白、抗体、酶类、DNA结合
具有高度特异性，按照功能划分的抗体有 Fab 区和 Fc 区。其中的 Fab 是抗原结合片段，对特异性抗原有亲和力 (affinity)。 如果避免使用高亲和力抗体，可以考虑选取抗体上的 Fab 片段。将 Fab 与亲和 Strep 标签融合后，得到的表位标签 Fab-Streps，留有抗体-抗原相互作用，还具备标签-配体相互作用。 Fab-Streps 的 Fab 段既对目的细胞的特异性 CD 标记有着亲和力，能抓取目的细胞；Strep 段又能结合亲和层析中，固定在多种介质上的配体
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