Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPC

Characterization of Phosphopeptides Using a Combination of Immobilized Metal Ion Affinity Media and Direct Analysis by MALDI-TOF-MS

of interestSodium citrate (50 mM, pH 6.0)TPCK-modified trypsin (sequence-grade)EquipmentCompact reaction columns (CRC) and filters (35-µm pore size)Incubator (slow rotation, e.g., rotating wheel)MALDI mass spectrometer (e.g., the Voyager DE-STR) or equivalentThe

肽质量指纹图谱—MALDI-TOF 法鉴定蛋白质

甲基酮（TPCK ) 进行了处理从而避免非特异性胰蛋白酶的活性。 c. 在分子质量 600~4000 Da 中，由于氨基酸 K 和 R 的存在，通过胰蛋白酶作用，产生了大部分的蛋白酶水解肽段，这和高分子质量精确的 MALDI-TOF-MS 兼容。 d. 商业猪胰蛋白酶赖氨酸侧链进行了甲基化还原处理，这样可减少自切肽段，但是在 842.5099 Th 和 2211.1046 Th 的两个信号强的离子峰能用于质谱内的校正平衡。 e. 蛋白酶水解肽段很容易就能质子化（并且在质谱分析中产生很好的信号

【求助】如何使用抑制剂？

/L 通过鳌合蛋白酶维持活性所必需的金属离子来抑制金属蛋白酶。 多肽蛋白酶抑制剂，使用浓度为2-20ug/ml 亮肽素（Leupeptin）能抑制多种丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶；抑肽素（pepstatin）抑制天冬氨酸蛋白酶；抑肽酶（aprotinin）能抑制许多丝氨酸蛋白酶；苯丁抑制剂（bestatin）能抑制氨基酸多肽酶 TLCk，TPCK，使用浓度为0.1-0.5mmol/L 不可逆的抑制丝氨酸和半胱氨酸的蛋白酶 苄脒（Benzamidine）使用浓度为1-3mmol/L 抑制丝氨酸蛋白酶