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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-70
- 供应商:
上海觅拓
- 规格:
20×50μl
GV3101菌株为农杆菌C58型背景,核基因中含有利福平抗性基因rif。此菌株还携带一种自身转运功能丧失的质粒(disarmed Ti plasmid)。GV3101菌株含有pMP90 (pTiC58DT-DNA),该质粒含有vir基因(vir基因是TDNA插入植物基因组所必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可辅助植物双元表达载体的T-DNA的转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒还含有Str和Gent抗性基因,赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性。GV3101农杆菌适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。GV3101 电转感受态特别适用于大质粒的转化,经pCAMBIA2301 质粒检测转化效率大于105 cfu/μg DNA。
产品特点
基因型:C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (StrR/GentR), Nopaline type
产品储存
-70℃保存,避免反复冻融。
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文献和实验双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线,28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中,220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中,28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。1.1.4. 转入无菌离心管,5000rpm离心5min,去上清液。1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置
试剂准备: LB培养基: 500mL 双蒸水:600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油:1000mL 预冷 250ml离心杯:高压灭菌 预冷 50mL离心管数个,250mL摇瓶4个,1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤: 1、接种原代菌(DH5α或DH10B),次日挑取单菌落,放入1mL LB培养基中,37℃,300rpm,6 hr
1从微量培养基平皿中挑取单个菌落,接种于5ml 2×YT培养基(17g蛋白胨,10g Bactoyeast,5g NaCl,加水至1 000ml)中,37℃振荡培养过夜。 2取上述过夜菌1∶100稀释接种入500ml新鲜的2×YT培养液中,37℃振荡培养至OD=05~07,约25~3h。 3将上述带有菌液的三角瓶置冰浴15~30min
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