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文献和实验要的是预防,因为细胞一旦污染,想救是非常困难的,即便救活,细胞状态也会变差,进而影响实验结果,所以我这边先来讲讲如何预防。生物安全柜是细胞处理的主要场所,而培养箱是细胞生长的主要场所,所以细胞污染通常就发生在这两个地方。那么在使用生物安全柜和培养箱时如何做好预防措施呢? 首先,所有进入安全柜的东西都要尽可能保证无菌。如果实验室条件允许,那直接购买商品化的试剂和耗材是最稳妥的,例如Gibco、Hyclone的试剂,Eppendorf、Corning的耗材,这些大品牌的试剂和耗材一般只要是正品
] dCTP (>400Ci/mmol),EDTA (50mM 和200mM),TE-饱和酚:氯仿(1:1),7.5M NH4Ac,乙醇(100%和70%),TE 缓冲液。 2. 操作步骤 (1) 取一灭菌的无RNA 酶的eppendorf 管,加入RNA 模板和适当引物,每μg RNA 使用0.5μg 引物(如使用NotⅠ引物接头,使用0.3μg),用H2 O 调整体积至15μl, 70℃处理5 分钟,冷却至室温,离心使溶液集中在管底,再依次加入5×第一链缓冲液5μlrRNasin RNA
清清蛋白(组分V.Sigma 产品)(可用可不用),10mol/L ATP(过滤灭菌)。 2、T4 DNA连接酶(T4 DNA ligase);购买成品。 3、X-gal储液(20mg/ml): 用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的储液, 包以铝箔或黑纸以防止受光照被破坏, 储存于-20℃。 4、IPTG储液(200mg/ml): 在800μl蒸馏水中溶解200mg IPTG后,用蒸馏水定容至1ml,用0.22μm滤膜过滤除菌,分装于eppendorf管并储于-20℃。 5、麦康凯选择
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