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文献和实验mm培养皿培养。24h后换成DF12+N2的无血清培养液,此后每三天半量换液1次。 瓶底星形胶质细胞的继续培养 25cm2培养瓶内的星形胶质细胞用D-Hanks液洗2次后常规传代,以1.5×105/cm2种入预先用100μg/L多聚赖氨酸包被好的35mm培养皿培养。培养液为GM,每三天半量换液1次。 动脉粥样硬化患者VSMC的提取 实验材料:眼科剪刀1把 眼科镊子2把 1×PBS约200ml M199培养液 离心机 5ml小皿 10ml大皿 实验步骤: 1.在超净台内用10ml的离心
、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替。 (2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种。用于外周血培养的常用10ml普通圆瓶。两种培养瓶均要求选用优质玻璃制成。 (3)培养皿:用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm等几种。 (4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类
细胞层,然后去除清洗液。 3、以2~3ml/25cm2的量,加选择的分离液(见表)到培养瓶对着细胞的一面。确保分离液覆盖细胞层。在37℃孵育培养瓶,轻轻摇动培养瓶。通常,在5到15分钟内,细胞就会脱落。细胞分离需要的时间因细胞系不同而有所变化。仔细监测细胞分离过程,避免细胞受损伤。对难于从培养瓶基层分离的细胞系,可以轻轻敲打,以加速分离过程。 4、当细胞完全分离时,垂直放置培养瓶,让细胞流到培养瓶的底部。在培养瓶中加入完全培养基,通过移液管在单层细胞表面反复吹打来分散细胞。计数并再次
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