Agilent InteroCyte 无阴影成像微孔板（96

Agilent InteroCyte 无阴影成像微孔板为实现无阴影全孔图像提供了可靠解决方案。独特的孔设计消除了成像孔中弯液面产生的影响，分析时使用细胞分析工作流程中的常用体积即可。在进行无标记细胞分析试验（如细胞增殖和毒性评估）时，可获得准确、可靠的数据。除了荧光成像外，InteroCyte SFI 微孔板还支持体积小于 250 µL 的非全孔、无标记成像。除了荧光成像外，InteroCyte SFI 微孔板还可用于体积小于 250 µL 的其他常规成像应用，比如对每孔的一部分进行无标记成像。这种特点使 InteroCyte SFI 微孔板成为一种用途广泛的消耗品，可以集成到现代研究实验室的各类分析工作流程中。

为了满足研究人员对高可靠性细胞增殖分析解决方案的需求，我们开发出了 96 孔 Agilent InteroCyte 无阴影成像 (SFI) 微孔板。这款微孔板采用独特的孔设计：

• 可轻松消除成像区域中弯液面造成的阴影
• 分析时使用 96 孔板规格的常用体积，且无需进行任何图像处理
• 这款微孔板的长宽尺寸还符合 ANSI/SLAS 微孔板标准，因此不仅可以与安捷伦成像系统（例如 BioTek Cytation 和 Lionheart 系统以及 xCELLigence RTCA eSight）搭配使用，还能兼容任何显微镜系统。

InteroCyte 无阴影成像 (SFI) 微孔板使用效果测评

实验材料

• 细胞和培养基：本次评估使用的是 HeLa 细胞，这种细胞经过基因改造可以表达红色荧光蛋白 (RFP)，其信号可以被 Texas Red 成像模块捕获。细胞培养使用 Eagle 最低限度基础培养基（ATCC，货号 30-2003），按照供应商推荐的方案添加 10% 胎牛血清 (FBS) 和 1% 青霉素/链霉素 (pen/strep) 作为培养基补充成分。
• 仪器和软件：使用 Agilent BioTek Lionheart FX 全自动智能成像分析系统上的宽场 (WFOV) 相机捕获图像。使用安捷伦 4x 平场扩展型复消色差空气物镜（货号 1220573）捕获所有图像。高对比度明场 (HCBF) 成像模块用于捕获无标记图像，而荧光成像模块以及安捷伦 590 nm LED 模块（货号 1225002）和 Texas Red 滤光片模块（货号 1225102）则用于捕获荧光图像。并使用Agilent BioTek Gen5 Image Prime 软件进行图像捕获和分析。

实验结果

更佳的明场和荧光场成像效果

图1：从 Agilent InteroCyte SFI 微孔板（A 和 B）和对照孔板（C 和 D）的孔中采集的 4 倍拼接图像。使用 HCBF 成像（A 和 C）以及 Texas Red 荧光通道（B 和 D）采集的图像

更准确的细胞定量分析

使用相同分析标准对采集的图像进行细胞分析时，可明确定量弯液面阴影对数据质量的影响（图 2）。在代表性 InteroCyte SFI 微孔板中，使用 HCBF 通道时孔内计数细胞数 (13225) 是 Texas Red 通道计数细胞数 (13280) 的 99.6%。相比之下，在代表性对照孔板中，使用 HCBF 通道时孔内计数细胞数 (8711) 仅为 Texas Red 通道计数细胞数 (10156) 的 85.8%。

图2：对在 72 h 时间点从 Agilent InteroCyte SFI 微孔板（A 和 B）和对照孔板（C 和 D）的孔中采集的 4 倍拼接图像进行细胞分析后应用对象 Mask。对 HCBF 图像（A 和 C）以及 Texas Red 荧光图像进行分析（B 和 D）

更可靠的细胞增殖数据统计

根据细胞增殖研究中的测试板数据，绘制细胞计数随时间变化的曲线图。图 3A–3C 显示，在 InteroCyte SFI 微孔板采集的 HCBF 和 Texas Red 图像中，细胞计数结果高度一致。而图 3D–3F 则显示了对照孔板中细胞计数的显著差异。使用 HCBF 通道成像时，孔边缘的细胞在整个研究过程中都未被计数。随着这些细胞不断增殖，细胞计数的误差越来越大。

图3：使用 Agilent InteroCyte SFI 微孔板 (A–C) 或对照孔板，根据 HCBF 或 Texas Red 图像绘制的 72 h 细胞增殖曲线 (D–F)

使用 GraphPad Prism 对生成的 HCBF 和 Texas Red 细胞增殖曲线的斜率之间的差异进行统计分析，相当于协方差分析（表 1）^[2]。

表 1. 由三块对照孔板和三块 Agilent InteroCyte SFI 微孔板测试板的 HCBF 和 Texas Red 细胞计数生成的曲线斜率。还报告了使用 GraphPad Prism 得到的斜率比较测试的 p 值

使用对照孔板生成的细胞增殖曲线进行比较的 p 值均小于 0.0001。根据既定标准，两条曲线之间具有显著差异，因为它们的 p 值小于 0.001。另一方面，每块 InteroCyte SFI 微孔板计算得出的 p 值均大于 0.4，根据标准（p 值大于 0.05），不同成像通道之间无显著差异。