离心管支持衬垫，500ml PEI（聚醚酰亚胺）材质,，未灭

人外周血PBMC的制备及注意事项

到离心机，500 g 离心 25 min。 小心取出离心管，吸取中间层的白色薄膜层，即为单个核细胞。 用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞，250g 离心 10 min，弃上清。 重复洗涤一次。 用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。 注意事项： Ficoll 使用时的温度很重要，温度太高或者太低都会影响分离效果。 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血 2 h 以内），为保持细胞活力，应避免冷冻和冷藏。 3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差，为了获得最大量的单核细胞，最好用15

类器官培养与应用——肠类器官

、在立体显微镜下，可以看到明显的 3D 结构。使用 200μl 移液器吸头从每个孔中收集球状体，并将大约 50 个球状体集中到 5ml 微量离心管中。   中肠和后肠球状体生长成人肠类器官 11、收集球状体后，将微量离心管垂直放置在管架上 10min，此时球体通过重力沉降到离心管底部。吸出上清，控制总体积在 25μl 左右。 12、将冻存的 Matrigel 在 4℃ 下过夜解冻，添加 B-27 补充剂(终浓度 1×)、R-spondin1 (终浓度 500ng/ml)，Noggin (终浓度100

类器官培养与应用——肺类器官

-4 - - - 500ng/ml - - CR08 FGF-7 - - - - - 10ng/ml CH73 FGF-10 - - - - 500ng/ml - CR11 Wnt3a - - - 500ng/ml - 750ng/ml C06D/C18K Noggin - - - 200ng/ml - - CB89   hPSCs 培养和传代 1、将冻存