L可穿刺铝制密封膜（卷），1卷/盒

RNA介导的基因沉默

的 ULTRAhyb-Oligo 缓冲液（17x 缓冲液）。使用前需在 68℃ 环境中进行溶解。 ( 7 ) 用 0.5 U T4 多核苷酸激酶（PNK，Roche) 和 6 μl  [γ-32P ]  ATP ( 5000 Ci/mmol ) 标记 1 μmol/L DNA 寡核苷酸（约含有 10 个与目的基因互补的 DNA 寡核苷酸）。 ( 8 ) 参照 Hamilton 和 Baulcombe 的方法，在 35°C 条件下进行 RNA 印迹杂交[14]。 3. 注释 注

【资源】Western Blot 简略而细致

烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。 3、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。 4、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用

【资源】个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）

比例为1：10，000，康成生物Cat＃KC-5G5）。采用化学发光试剂盒（康成生物Cat＃KC-420）及X胶片曝光显影。一次反应即可同时检测目的蛋白（Akt）与内参GAPDH的含量。actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，这些不同的亚型组织分布是不一样的，在肌肉组织中的beta-actin分布就很少，心肌主要是alpha-cardiac muscle actin。因此不同的组织本来就应该选择不同的内参，不能一概而论的。beta