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文献和实验D-生物素(MW 244) 122 mg 加蒸馏水至 1000 mL配制:将上述成分加热,以溶解生物素,然后在 0.068 MPa 下高压灭菌 20 min。贮于 4 ℃ 冰箱。6.2 顶层琼脂培养基 成分: 琼脂粉 1.2 g 氯化钠 1.0 g 加蒸馏水至 200 mL 配制:上述成分混合后,于 0.103 MPa 下高压灭菌 30 min。实验时,加入 0.5 mmol/L组氨酸—0.5 mmol/L生物素溶液 20 mL
水中。以0.22μm无菌过滤膜过滤灭菌。分装100 ml至瓶中,保存于 -70℃。 · 液体培养基 (1 liter) :称取21 g之Difco PPLO broth,0.02 g phenol red 于600ml蒸馏水中,加热搅拌溶解之。灭菌121℃,15分钟。待温度降低至室温后,于无菌操作台内加入200ml马血清,100ml之15% yeast extract solution,及100ml解涷之10x stock solution,混合均匀后,分装至已灭菌之有盖螺旋试管中,10ml/管。保存
,121℃高压灭菌15分钟,分装10ml小瓶,冷却后4℃保存。c、小鼠腹腔细胞。d、灭菌平皿。e、45℃水浴。f、活力很好的杂交瘤细胞。方法:a、在培养皿中制备饲养细胞(小鼠腹腔细胞)单层。b、临用前将2.0%琼脂糖生理盐水溶液与等量双倍浓度的HT培养液混匀,配成1%琼脂糖培养液,45℃水浴中温育。c、吸去平皿上层培养液,加入1%琼脂糖培养液3ml,室温10分钟。d、取杂交瘤细胞悬液1ml,加入1%琼脂糖培养液1ml混匀,铺于上层。e、37℃、7.5%湿润培养7-14天;克隆生长至2mm时,用毛细
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