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10×BU溶液(pH 7.0,
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10×BU buffer
一年
上海信裕生物科技有限公司
RT
瓶
中文名:10×BU溶液(pH 7.0,过滤除菌)
英文名:10×BU buffer
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:RT
本试剂用于EGY48酵母杂交系统中,LacZ报告基因的检测;当有互作发生,lacz报告基因表达,生成β-半乳糖苷酶,将x-gal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4氯靛蓝。
每个成分可以单独提供,或直接购买套装。
试剂准备:
1.筛选培养基配置:请将0.5L 的SD/-Trp/-Ura with Agar干粉,加入500mL的蒸馏水中,搅拌后于115℃灭菌 20min 后倒板;
注意:灭菌的培养基如有剩余,可置于超净台密封保存,再次使用时微波加热溶解后倒板即可。
2.显色培养基配置:
注意:半乳糖、棉子糖以及x-gal请在灭菌后,培养基冷却到55℃ 之后加入。半乳糖和棉子糖由于加入体积较大,请先置于55℃ 预热后加入,放置凝固过快。显色平板请尽快使用。3天内避光4℃保存的板子亦可以使用。
操作方法:(以EGY48-pLacZi酵母单杂交体系为例)
1.载体构建pLacZi-X & pB42AD-Y;
2.载体共转化EGY48酵母感受态细胞;
3.转化产物涂布SD/-Trp/-Ura with Agar 平板,28-30℃培养3-5天;
4.阳性克隆检测(菌落PCR);
5.阳性菌落涂布SD-Ura-Trp/x-gal显色平板,28-30℃培养3-5天后观察显色反应。
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