过滤除菌操作

问：最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？

答：你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！

答：如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后，过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。

如果用小量的溶液过滤，无菌室内用一次性注射器和一次性0.22um滤膜（millipore或pall都有卖）就可以。

答：看过滤的量，如果量小，用注射器加滤器、0.22微米滤膜过滤，滤器加上滤膜后盖紧，稍旋松，饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌，用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作，并先旋紧滤器，注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌；过滤应该是费力的，如果感觉很轻松，则滤膜已破。0.45微米的滤膜一般用于两次过滤的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高压更好些。

如果量大，正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜，这些都是要高压的。负压可用抽滤。