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- 2026年01月04日
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- 服务名称：
吉玛western blot检测技术服务及检测试剂盒
- 提供商：
吉玛基因
定义
Western Blot即蛋白免疫印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测样品中某种蛋白的方法。其利用SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，保证了快速、准确的检测，对蛋白进行定性和半定量分析。
原理
- 蛋白分离原理
2. 抗体检测原理
实验流程
结果举例
注： B：Blank，空白细胞样品
NC：Negative Control，转染阴性对照的细胞样品
1,2,3,4：实验组，转染不同干扰序列的细胞样品
对上图扫描胶片进行条带的灰度分析，得到量化的数值，并用目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品目的蛋白相对含量。
| B | NC | 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Target | 100 | 109.14 | 95.133 | 88.991 | 22.849 | 61.807 |
| β-actin | 100 | 91.701 | 97.811 | 102.82 | 97.488 | 96.645 |
| Target/actin | 1 | 1.190172 | 0.972621 | 0.865503 | 0.234378 | 0.639526 |
依据灰度值结果做柱状图
上述胶图和灰度分析均显示4条筛选序列中，3号序列干扰效果较好
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| 产品名称 | 规格 | 报价(RMB) | 选择 |
| 蛋白裂解液(1×RIPA 裂解液，增强型) | 25ml | 200.00 | |
| PMSF（100nM） | 0.5ml | 30.00 | |
| 30%Acr/Bis(29:1) | 50ml | 50.00 | |
| 4×Tris.Cl/SDS, pH 8.8（1.5M） | 30ml | 30.00 | |
| 4×Tris.Cl/SDS, pH 6.8（0.5M） | 10ml | 10.00 | |
| TEMED（进口分装） | 0.5ml | 10.00 | |
| APS | 0.1g | 10.00 | |
| 4×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(4×loading buffer) | 10ml | 120.00 | |
| β-巯基乙醇 | 1ml | 10.00 | |
| 蛋白预染marker（11-170kDa）（进口分装） | 25ul | 100.00 | |
| 10×SDS-PAGE 电泳缓冲液(10×running buffer) | 200ml | 80.00 | |
| 10×转膜缓冲液(10×transfer buffer) | 200ml | 100.00 | |
| Tween-20 | 1ml | 10.00 | |
| 10%SDS | 25ml | 50.00 | |
| 脱脂奶粉 | 5g | 10.00 | |
| 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（进口分装） | 50μl | 100.00 | |
| 辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG（进口分装） | 50μl | 100.00 | |
| 5张PVDF膜/0.45μm（进口分装） | 10cm*10cm | 250.00 | |
| 5张PVDF膜/0.45μm（进口分装） | 8.5cm*5.5cm | 150.00 |
本试剂盒特点：通用性好，可以减少客户购买、配制试剂的繁琐工作，减少相关试剂浪费。综合性价比高。
以上试剂也可单独订购，订购两倍及以上试剂规格，如两倍规格价格：基础价*2*0.6。
服务价格：
客户提供可以用于WB检测的组织或细胞样品；
1、每个样品每个蛋白费用：120元；
2、每个蛋白一张膜：1000元；（每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白，最多可以做到12个目的样品。一抗另计，其它试剂免费）
3、多种目的蛋白检测计费：100元*样品数*目的蛋白数；
4、每种抗体验证费用300元；
服务周期：通常2-4周；样品数量多或蛋白表达丰度较低时，时间周期另外商议；
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文献和实验443201299 吉玛的shRNA质粒怎么样??吉玛的shRNA质粒最便宜，但不知道它的质量如何，有谁用过吗？感觉质量怎么样？ 西厢蔷薇 买过几次，一般吧。 443201299 下调效率怎么样？？ shylook 还是不错的 443201299 吉玛的shRNA质粒载体好像是最便宜的！ 西厢蔷薇
样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
llh刘丽华 各位好：我做了1个多月western blot了，内参跑得还可以，但是目的蛋白总是跑不好，今天跑出来非特异性条带很清楚，而目的条带却很淡，不知是什么原因！前一次也是这种情况，我就延长封闭时间至2h，一抗1:700，二抗1:5000，请各位高手帮忙分析一下吧！下面是我的图片，最下面，模糊的一条（靠图片中间的一条）是我的目的条带！ coffeeshine 如果非特异带很清楚，延长封闭时间没作用
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