吉玛western blot检测技术服务及检测试剂盒

技术简介
定义
Western Blot即蛋白免疫印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测样品中某种蛋白的方法。其利用SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，保证了快速、准确的检测，对蛋白进行定性和半定量分析。



原理

1. 蛋白分离原理

样品在含有强还原剂的SDS溶液中加热处理后，蛋白质发生变性和解离，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。这种复合物由于结合大量的SDS，电泳时在凝胶中的迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而主要取决于蛋白质分子量。

2. 抗体检测原理 通过SDS-PAGE按照分子量大小分离蛋白质样品，转移到PVDF膜或NC膜上，以膜上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体（一抗）起免疫反应，一抗再与酶标记的抗体（二抗）起抗原抗体反应，最后底物化学发光显色检测电泳分离的特异性目的蛋白成分。


实验流程



结果举例

注： B：Blank，空白细胞样品
NC：Negative Control，转染阴性对照的细胞样品
1,2,3,4：实验组，转染不同干扰序列的细胞样品



对上图扫描胶片进行条带的灰度分析，得到量化的数值，并用目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品目的蛋白相对含量。

	B	NC	1	2	3	4
Target	100	109.14	95.133	88.991	22.849	61.807
β-actin	100	91.701	97.811	102.82	97.488	96.645
Target/actin	1	1.190172	0.972621	0.865503	0.234378	0.639526

依据灰度值结果做柱状图

上述胶图和灰度分析均显示4条筛选序列中，3号序列干扰效果较好

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2、每个蛋白一张膜：1000元；（每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白，最多可以做到12个目的样品。一抗另计，其它试剂免费）
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服务周期：通常2-4周；样品数量多或蛋白表达丰度较低时，时间周期另外商议；